CFDA, SE 細胞增殖示蹤熒光探針

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

CFDA, SE，英文全名5(6)-Carboxyfluorescein diacetate N-succinimidyl ester，CAS NO. 150347-59-4，是一種穩定的、細胞膜滲透性的非熒光染料，由兩個(gè)醋酸基團和一個(gè)琥珀酰亞胺酯（SE）官能團組成的一個(gè)熒光分子。一旦主動(dòng)擴散進(jìn)入細胞，其醋酸基團被胞內酯酶切割，生成熒光素酯CFSE。CFSE具有高度熒光，且能通過(guò)其琥珀酰亞胺酯基團共價(jià)結合到細胞內的蛋白氨基基團。正是這個(gè)共價(jià)偶聯(lián)反應，CFSE能夠極其長(cháng)期的保留在細胞內，長(cháng)達數個(gè)月。另外，歸因于這一穩定連接，一旦染料進(jìn)入細胞，不會(huì )轉移到鄰近細胞。無(wú)活力細胞仍然是非熒光。而活細胞一旦分化，CFSE能夠很均勻的分散到子細胞中，每分裂一次子代細胞約能得到親本細胞1/2的熒光強度，因此，通過(guò)流式細胞儀對熒光強度的檢測，能夠依次分選出未分裂細胞，分裂一次的細胞（1/2熒光強度），分裂兩次的細胞（1/4熒光強度），分裂三次的細胞（1/8熒光強度），以及以此類(lèi)推其他分裂次數的細胞。CFSE可以檢測分裂多達8次或更多次數的細胞增殖。

CFSE廣泛用于細胞增殖和體內細胞示蹤研究。CFSE的最大激發(fā)和發(fā)射波長(cháng)分別為492nm和517nm，標記細胞后呈綠色熒光。使用流式細胞儀檢測可用FL1檢測通道。也能用熒光顯微鏡觀(guān)察，使用FITC濾片。

產(chǎn)品特性：

1） CAS NO.：150347-59-4

2） 化學(xué)名：3',6'-bis(acetyloxy)-3-oxo-2,5-dioxo-1-pyrrolidinyl ester-spiro[isobenzofuran-1(3H),9'-[9H]xanthene] -ar-carboxylic acid

3） 同義名：5(6)-Carboxyfluorescein diacetate N-succinimidyl ester, 5(6)-CFDA N-succinmidyl ester, CFDA-SE

4） 分子式：C29H19NO11

5） 分子量：557.46

6） 純度：≥94%（HPLC）

7） Ex/Em：492/517nm

8） 外觀(guān)：近乎白色至黃色粉末或結晶

9） 溶解性：溶于DMSO，DMF

10）化學(xué)結構圖：

保存條件: 

-20oC避光干燥保存，至少2年有效。

產(chǎn)品使用：

1. 儲存液制備

將低溫保存的凍干粉產(chǎn)品置于室溫回溫至少20min，之后短暫低速離心，讓所有粉末都掉落至管底。稱(chēng)取適量粉末用高質(zhì)量無(wú)水DMSO溶解配制10mM儲存液。比如5mg CFDA, SE（Mw: 557.46）用897μl DMSO充分溶解即得到10mM儲存液。根據單次用量分裝，置于≤-20℃避光干燥保存，避免反復凍融。儲存液最好是一個(gè)月內用完，最多不超過(guò)三個(gè)月。

2. 工作液制備

于正式實(shí)驗前，用HHBS緩沖液或其他生理緩沖液（pH 7.0）稀釋儲存液到1-10μM工作濃度，渦旋混勻。

【注意事項】：

1） CFDA, SE是胺反應性。CFDA, SE標記步驟不可使用含首胺的緩沖液，比如，HHBS或PBS是推薦的CFDA, SE稀釋緩沖液。

2） CFDA, SE的染色濃度需要根據使用的細胞類(lèi)型和實(shí)驗目的來(lái)進(jìn)行優(yōu)化調整。比如，如果用于細胞增殖的熒光逐漸稀釋分析，相對高濃度的CFDA, SE染色工作液比較理想；如果僅是用來(lái)標記細胞用作另外一種熒光標志探針的復染劑，相對低濃度的CFDA, SE染色工作液比較理想，能夠良好的防止不同濾片設置間的熒光溢出。

3. 染色步驟

此染色步驟僅做指導，具體實(shí)驗步驟可根據實(shí)際情況來(lái)做適當調整。

3.1 室溫300×g離心細胞5min，吸掉上清。

3.2 用預熱的無(wú)菌HHBS，PBS或其他生理緩沖液清洗細胞以去除任何殘留的血清蛋白。之后同上離心細胞，吸掉上清。

3.3 用上述配制好的CFDA, SE染色工作液重新懸浮細胞，制備成1-3 x 10⁷cells/mL的單細胞懸液。

3.4 室溫或37℃避光孵育15~30min。中間可偶爾的輕輕顛倒混勻使得細胞均勻接觸到染料。

3.5 加入5倍原始染色體積的細胞培養液（含10% FBS）來(lái)淬滅染色過(guò)程，輕輕顛倒幾次混勻。

3.6 室溫300×g離心細胞5min，吸掉上清。再用10ml完全細胞培養液清洗細胞一次。

3.7 再用10ml完全細胞培養液重新懸浮細胞，37℃孵育5min，以促進(jìn)CFDA, SE在細胞內的充分反應和未反應的CFDA, SE重新回到完全細胞培養液中。離心去上清，完成最后一次清洗。

3.8 之后用完全細胞液重懸細胞，此時(shí)可用熒光顯微鏡或流式細胞儀來(lái)觀(guān)察標記效果?；蜷_(kāi)始用藥物刺激處理或繼續常規培養。經(jīng)適當時(shí)間后用流式細胞儀檢測細胞增殖，或用于特定目的的細胞示蹤。標記細胞也可用于活體動(dòng)物的移植，并用熒光進(jìn)行示蹤。

注意事項：

1.      為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

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