CFDA SE細胞增殖與示蹤檢測試劑盒

CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

CFDA SE細胞增殖與示蹤檢測試劑盒（CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit）是一款基于熒光探針CFDA, SE，用于細胞增殖檢測和細胞熒光示蹤的檢測試劑盒。此方法目前廣泛替代MTT法或者3H-胸腺嘧啶核苷摻入法（3H-thymidine incorporation）等細胞增殖檢測方法。本試劑盒包含粉末形式的CFDA, SE探針，細胞培養級的溶劑，以及細胞標記液，使用方便，操作簡(jiǎn)單。按照每個(gè)樣本的標記體積為1ml來(lái)算，我司提供兩種規格的試劑盒，分別可檢測500個(gè)和1000個(gè)樣品。

CFDA, SE，英文全名5(6)-Carboxyfluorescein diacetate N-succinimidyl ester，CAS NO. 150347-59-4，是一種穩定的、細胞膜滲透性的非熒光染料，由兩個(gè)醋酸基團和一個(gè)琥珀酰亞胺酯（SE）官能團組成的一個(gè)熒光分子。一旦主動(dòng)擴散進(jìn)入細胞，其醋酸基團被胞內酯酶切割，生成熒光素酯CFSE。CFSE具有高度熒光，且能通過(guò)其琥珀酰亞胺酯基團共價(jià)結合到細胞內的蛋白氨基基團。正是這個(gè)共價(jià)偶聯(lián)反應，CFSE能夠極其長(cháng)期的保留在細胞內，長(cháng)達數個(gè)月。另外，歸因于這一穩定連接，一旦染料進(jìn)入細胞，不會(huì )轉移到鄰近細胞。無(wú)活力細胞仍然是非熒光。而活細胞一旦分化，CFSE能夠很均勻的分散到子細胞中，每分裂一次子代細胞約能得到親本細胞1/2的熒光強度，因此，通過(guò)流式細胞儀對熒光強度的檢測，能夠依次分選出未分裂細胞，分裂一次的細胞（1/2熒光強度），分裂兩次的細胞（1/4熒光強度），分裂三次的細胞（1/8熒光強度），以及以此類(lèi)推其他分裂次數的細胞。CFSE可以檢測分裂多達8次或更多次數的細胞增殖。

CFSE廣泛用于細胞增殖和體內細胞示蹤研究。CFSE的最大激發(fā)和發(fā)射波長(cháng)分別為492nm和517nm，標記細胞后呈綠色熒光。使用流式細胞儀檢測可用FL1檢測通道。也能用熒光顯微鏡觀(guān)察，使用FITC濾片。

保存條件: 

-20oC保存，開(kāi)封前1年有效，其中組分A（CFDA SE粉末）需嚴格避光，組分B避免強光照射。

產(chǎn)品組成：

產(chǎn)品使用：

1. CFDA SE儲存液（1000X）制備

a）將低溫保存的CFDA SE粉末置于室溫回溫至少20min，之后短暫低速離心，讓所有粉末都掉落至管底。同時(shí)也提前將CFDA SE溶劑置于室溫或25℃水浴片刻直至充分融解。

b）吸取一定量CFDA SE溶劑（比如400μl）到CFDA SE粉末中，充分溶解，短暫低速離心，之后全部轉移到剩下的CFDA SE溶劑中，混勻后，此即為CFDA SE儲存液（1000X）。此配制過(guò)程需要避光。

c）按照單次用量分裝，用鋁箔紙包好后，置于≤-20℃避光干燥保存，最好一個(gè)月內用完，最長(cháng)不超過(guò)三個(gè)月。-70℃保存能適當延長(cháng)保存周期。

2. CFDA SE標記液（1X）制備

準備適量無(wú)菌的細胞培養級去離子水，根據實(shí)驗需要用量，配制適量的CFDA SE標記液（1X）。比如，取10ml 細胞標記液（10X），加入90ml 去離子水，充分混勻后，即得到CFDA SE標記液（1X），短期置于4℃保存，長(cháng)期不用可置于-20℃保存。

3. 染色步驟

a）室溫300×g離心細胞5min，吸掉上清。

b）PBS或其他生理緩沖液清洗細胞以去除任何殘留的血清蛋白。之后再同上離心吸掉上清。

c）用1ml CFDA SE標記液（1X）重懸細胞，調整密度為1-5 x 10⁶cells/mL，轉移到15ml離心管內。

d）用CFDA SE標記液（1X）將CFDA SE儲存液（1000X）稀釋到2X。比如，取2μl CFDA SE儲存液（1000X）到1ml CFDA SE標記液（1X），混勻后即為CFDA SE儲存液（2X）。

e）將1ml CFDA SE儲存液（2X）加入到步驟c）中含1ml 待標記細胞的15ml離心管內，輕輕混勻。

f）37℃避光孵育15min?！揪唧w的孵育時(shí)間可根據實(shí)際情況做適當調整，常用孵育時(shí)間10-30min?！?/span>

g）立即加入10ml完全細胞培養液（含血清）來(lái)淬滅染色過(guò)程，室溫顛倒幾次混勻。

h）室溫離心去上清，再用5-10ml完全細胞培養液清洗一次。

i） 再加入5-10ml完全細胞培養液，37℃孵育5min，以促進(jìn)CFDA, SE在細胞內的充分反應和未反應的CFDA, SE重新回到完全細胞培養液中。離心去上清，完成最后一次清洗。

j） 之后用完全細胞液重懸細胞，此時(shí)可用熒光顯微鏡（Ex/Em=492/517nm，FITC濾片）或流式細胞儀（FL1通道）來(lái)觀(guān)察標記效果?；蜷_(kāi)始用藥物刺激處理或繼續常規培養。經(jīng)適當時(shí)間后用流式細胞儀檢測細胞增殖，或用于特定目的的細胞示蹤。標記細胞也可用于活體動(dòng)物的移植，并用熒光進(jìn)行示蹤。標記的細胞呈綠色熒光。

注意事項：

1.      CFDA SE溶劑在低溫（如4℃，冰?。┑葪l件下會(huì )凝固而粘在離心管底、管壁或蓋子上，可將其置于25℃溫育片刻直至全部融解后使用。

2.      CFDA SE粉末經(jīng)溶劑溶劑配制成儲存液后一個(gè)月內用完最好，最多不超過(guò)三個(gè)月。因CFDA SE容易被水解，并在水溶液中變質(zhì)。使用過(guò)程中盡量避免接觸水。而在標記過(guò)程中接觸到水是在允許范圍內。

3.      熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，操作和儲存過(guò)程中需注意避光，以減緩熒光淬滅。

4.      為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

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