Calcein Deep Red AM 鈣黃綠素深紅乙酰氧基甲酯

【溫馨提示】：見(jiàn)我司整理的Calcein 鈣黃綠素（常用的活細胞熒光探針）專(zhuān)題，尋找最合適波長(cháng)的鈣黃綠素活細胞探針。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Calcein, AM，中文名鈣黃綠素乙酰甲酯，CAS NO：148504-34-1，一種具細胞膜滲透性最受歡迎的活細胞熒光染料，用來(lái)標記和監測活細胞功能，呈綠色熒光（Ex/Em= 490nm/515nm）。然而，Calcein, AM單一顏色使其不能將其用在多重標記實(shí)驗，比如，其無(wú)法和GFP轉染細胞聯(lián)合使用，因光譜一致。為了解決這一應用缺陷，我司特別開(kāi)發(fā)出Calcein Red（CAT NO.：NBS2016），Calcein Deep Red（CAT NO.：NBS2019）這些衍生物，能夠聯(lián)合GFP或FITC等熒光素實(shí)現對活細胞的多重標記和功能分析。

鈣黃綠素深紅乙酰氧基甲酯（Calcein Deep Red AM）自身無(wú)熒光，具有細胞膜滲透性。能夠輕易進(jìn)入活細胞，被細胞內酯酶水解生成鈣黃綠素深紅（Calcein Deep Red），產(chǎn)生強烈的深紅色熒光（Ex/Em=643/663nm），用標準的Cy5濾片設置檢測。

產(chǎn)品特性:

1）  同義名：Calcein Deep Red AM；Calcein Deep Red AM Ester;鈣黃綠素乙酰氧基甲酯（深紅色），鈣黃綠素深紅乙酰氧基甲酯；

2）  分子量：~600

3）  純度：≥95%（HPLC）

4）  Ex/Em：643/663nm

5）  溶解性：溶于DMSO（1~5mM）

保存條件: 

-20℃干燥保存，避免強光直射，有效期一年。

應用實(shí)例:

Fig 1.HeLa細胞（活細胞+固定細胞）經(jīng)Calcein Deep Red AM（CAT NO.：NBS2019）染色的圖片。

產(chǎn)品使用：

1、儲存液制備

儲存液配制范圍可為2～5 mM，具體根據工作濃度來(lái)決定，建議提前配制成1000×儲存液。若使用的工作液為5μM，那么可配制5mM的儲存液，即往1mg Calcein Deep RedAM（Mw ~600）內加入333μl細胞培養級別的DMSO即可。儲存液需要根據單次用量分裝，-20℃避光干燥保存，一定要避免受潮，此種情況下可穩定保存數月。

2、染色工作液制備

于正式實(shí)驗前，或溶解Calcein Deep RedAM粉末配制儲存液，或取一管已配制好的Calcein Deep RedAM儲存液并回至室溫使充分融化。用添加有2.5mM 丙磺舒（CAT NO. NBS2007）的HHBS（Hanks with 20mM Hepes buffer）或其他適當的緩沖液（pH 7.0）稀釋儲存液到5~10 μM工作濃度。

【注1：Calcein Deep Red染色工作液很不穩定，需要使用前配制?！?/span>

【注2：許多細胞都含有機陰離子轉運體。因此高度推薦染色工作液內添加2.5mM丙磺舒（有機陰離子轉運體抑制劑），以防止熒光探針泄露到細胞外?！?/span>

3、染色步驟

以下是基于96孔板的Calcein Deep Red活細胞染色步驟，僅作參考。具體實(shí)驗請根據自身要求做調整。

a. 細胞準備：于黑框/透明底的96孔微孔板內按照100~10,000個(gè)細胞/孔的量鋪板。設置空白孔（不含細胞的培養基）?！咀⒁狻浚好糠N細胞系需要根據實(shí)際情況來(lái)確認細胞增殖或細胞毒性誘導的最佳細胞密度。增殖分析，細胞密度相對少些；毒性分析，起始細胞密度高些。建議96孔板的單孔體積為100 μL。

b. 藥物處理：加待測藥物到細胞內處理適當時(shí)間（比如24h，48h或96h）。設置空白孔（不含細胞的培養基），加入相應量的待測藥物?！咀⒁狻浚核幬锾砑忧翱刹挥们逑醇毎?。然而，若是藥物是血清敏感性，那在添加藥物前需要吸掉生長(cháng)培養基和血清因子。替換之細胞用無(wú)血清培養基培養。

c. 吸掉培養基?！咀⒁狻浚禾结樇虞d前必須去除培養基。

d. 按照100 μL/孔（96孔板）的量加入Calcein Deep Red染色工作液。

e. 室溫或37℃避光孵育1h。

【注意1】：適當的孵育時(shí)間取決于細胞類(lèi)型和使用的細胞濃度。每個(gè)實(shí)驗建議進(jìn)行孵育時(shí)間優(yōu)化。

【注意2】：對于懸浮細胞，探針?lè )跤Y束后，于800rpm離心2min。

f. 用含合適濾光片（Ex/Em= 643nm/663nm）的儀器進(jìn)行熒光檢測?！咀⒁猓喝绻麩晒獗尘案?，可在熒光信號檢測前用含2.5mM丙磺舒的HHBS緩沖液替換Calcein Deep Red染色工作液?！?/span>

注意事項：

1.      熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2.      乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后請在干燥的環(huán)境放至室溫后再開(kāi)封。由于試劑微量，開(kāi)封前請將其短暫離心，以保證粉末落入管底。

3.      Calcein Red AM對濕度非常敏感，粉末保存一定要保持干燥。Calcein Red AM儲存液需要分裝避光凍存，且必須緊緊密封蓋子，干燥保存。Calcein Red AM工作液必須現配現用。

4.      為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

產(chǎn)品訂購：