Cell-Tracker Blue CMAC 活細胞示蹤探針（藍色）

【溫馨提示】：見(jiàn)我司整理的Cell-Tracker細胞示蹤/細胞追蹤熒光探針專(zhuān)題。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Cell-Tracker熒光探針是用來(lái)監測細胞運動(dòng)、定位、增殖、遷移、趨化和侵襲的優(yōu)秀工具。

Cell-Tracker Blue CMAC，英文全名：7-amino-4-chloromethylcoumarin（7-氨基-4-氯甲基香豆素），是氨基香豆素的氯甲基衍生物，能自由穿透細胞膜進(jìn)入細胞，在胞內轉化生成不具細胞膜滲透性的反應產(chǎn)物。該產(chǎn)物幾次傳代都能良好的保留在活細胞。在細胞群內，染料只會(huì )轉移到子代細胞，不會(huì )轉移到鄰近細胞。

Cell-Tracker Blue CMAC特地設計使其至少72h（典型有3~6代）能展示熒光，此染料表現出理想的示蹤特征：穩定、工作濃度下無(wú)毒性、良好保留在細胞，且在生理pH下呈明亮熒光。另外，Cell-Tracker Blue CMAC的激發(fā)和發(fā)射光譜（353/466nm）與綠色熒光蛋白GFP或紅色熒光蛋白RFP很好的分開(kāi)，適用于多重標記（見(jiàn)附表1. Cell-Tracker熒光探針的光譜特征）。

產(chǎn)品特征：

1） CAS NO.：147963-22-2

2） 同義名：CellTracker Blue CMAC; 7-amino-4-chloromethylcoumarin; 7-氨基-4-氯甲基香豆素;

3） 分子式：C10H8ClNO2

4） 分子量：209.6 g/mol

5） 外觀(guān)：白色至類(lèi)白色固體

6） 溶解性：溶于DMSO

保存條件: 

-20℃避光干燥保存，至少2年有效。

產(chǎn)品使用：

1．細胞準備

在合適的培養基內培養細胞。貼壁細胞可以在含蓋玻片的培養皿內爬片生長(cháng)，裝入足量的生長(cháng)培養基。

2．操作步驟

以下描述的是將染料加到培養細胞以及在熒光顯微鏡下成像的步驟。各種因素，比如將染料加載到細胞或組織，可能都需根據特定的細胞類(lèi)型對某些條件做出修改。

探針的最佳染色濃度需根據用途來(lái)調整。建議剛開(kāi)展實(shí)驗需要測定至少1個(gè)10倍范圍內的濃度。一般來(lái)說(shuō)，長(cháng)期染色（≥3天）或使用快速分裂的細胞需5-25μM的染料。對于短期實(shí)驗（比如活力測定），使用低濃度染料（0.5-5μM）。為了維持正常的細胞形態(tài)和降低潛在的偽影，盡可能使用低濃度的染料。

2.1 制備Cell-Tracker染色工作液

① 開(kāi)瓶前將產(chǎn)品從冰箱取出，放到室溫使其回溫至少20min。

② 用高質(zhì)量的無(wú)水DMSO溶解粉末使其濃度為25mM。例如，對5mgCell-Tracker Blue CMAC（MW: 209.63 g/mol）凍干粉，加入954μl DMSO充分溶解，即得到25mM母液。儲存液根據單次用量分裝避光凍存，減少反復凍融次數。

③ 用無(wú)血清培養基稀釋母液到0.5-25μM的工作濃度。預熱染色工作液到37℃。

2.2 懸浮細胞染色步驟

① 離心收集細胞，吸掉上清液。用預熱的Cell-Tracker染色工作液輕輕的重懸細胞。

② 在適合特定細胞類(lèi)型的生長(cháng)條件下避光孵育15-45min。

③ 離心細胞，吸掉Cell-Tracker染色工作液。

④ 加入選擇的培養基，將標記好的細胞分配到載玻片或到選擇的培養器皿內。

⑤ 根據附表1 選擇合適激發(fā)和發(fā)射波長(cháng)的濾片來(lái)進(jìn)行成像檢測。

2.3 貼壁細胞染色步驟

① 吸走培養基。

② 輕輕加入預熱的Cell-Tracker染色工作液。

③ 在適合特定細胞類(lèi)型的生長(cháng)條件下避光孵育15-45min。

④ 吸掉Cell-Tracker染色工作液。

⑤ 加入選擇的培養基。

⑥ 根據表1 選擇合適激發(fā)和發(fā)射波長(cháng)的濾片來(lái)進(jìn)行成像檢測。

3．熒光顯微鏡觀(guān)察

Cell-Tracker熒光探針可用帶標準光學(xué)和圖像增強的各種落射熒光光學(xué)顯微鏡檢測。根據染料選擇合適的濾片。見(jiàn)附表1 Cell-Tracker熒光探針的光譜特征。

表1. Cell-Tracker熒光探針的光譜特征

注意事項：

1.      熒光染料都存在淬滅的問(wèn)題，保存和操作過(guò)程中注意避光。

2.      避免使用含氨基和巰基的緩沖液。

3.      為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

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