DiIC18(3)-DS 細胞膜橙紅色熒光探針

【溫馨提示】：見(jiàn)我司整理的細胞膜熒光探針（Tracers for Membrane Labeling）產(chǎn)品專(zhuān)題 。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

 DiIC18(3)-DS是DiI（DiIC18(3), Cat#：NBS5129）的磺酸化衍生物，具有更好的水溶性，且在固定和透化處理后能維持良好的染色狀態(tài)。

DiIC18(3)-DS是橙色熒光和親脂性碳菁類(lèi)染料-DiI（DiIC18(3)）的類(lèi)似物，英文全名：1,1'-Dioctadecyl-3,3,3',3'- Tetramethylindocarbocyanine-5,5'-Disulfonic Acid，包含磺酸基團以改進(jìn)探針的水溶性。在水中呈弱熒光，插入膜內則呈強熒光且相當穩定。在脂質(zhì)環(huán)境內具極其高的摩爾吸光系數和短的激發(fā)態(tài)壽命（~1ns）。一旦進(jìn)入細胞后，在細胞內質(zhì)膜中逐步擴散，于最佳濃度條件下可將整個(gè)細胞均勻染色。

保存條件: 

-20oC干燥避光保存，有效期至少一年。

產(chǎn)品使用：

【注意】以下使用方法僅用作參考，可根據具體的實(shí)驗條件做出調整。

1. 染色液制備

1）儲存液制備：用DMSO配置濃度1～5 mM的儲存液。例如，取5mgDiIC18(3)-DS（Mw：993.53g/mol）溶于1ml無(wú)水DMSO中，充分溶解，即得到5mM的儲存液?！咀⒁狻课词褂玫膬Υ嬉焊鶕未斡昧糠盅b儲存在-20℃，避免反復凍融。

2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無(wú)血清培養基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，調整到1～5 μM的工作濃度?！咀⒁狻抗ぷ饕鹤罱K濃度需要根據不同細胞系和實(shí)驗體系來(lái)優(yōu)化。建議從推薦濃度開(kāi)始，以10倍范圍為區間進(jìn)行最優(yōu)濃度的摸索。

2.懸浮細胞染色

1）加入適當體積的染色工作液重懸細胞，使其密度為1×10⁶/mL。

2）37℃孵育細胞2～20min，不同的細胞最佳培養時(shí)間不同?？梢?span>20min作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化以保證得到均一化的標記結果。

3）孵育結束，按1000～1500 rpm離心5min。

4）去除上清液，之后輕柔加入37℃預熱的生長(cháng)培養液重懸細胞。

5）再重復3），4）步驟兩次。

3.貼壁細胞染色

1）將貼壁細胞培養于無(wú)菌蓋玻片上。

2）從培養基中移走蓋玻片，濾掉過(guò)量培養液，將蓋玻片放在潮濕的小室內。

3）在蓋玻片的一角加入100μL的染色工作液，輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細胞。

4）37℃孵育細胞2～20min，不同的細胞最佳培養時(shí)間不同?？梢?span>20min作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化以保證得到均一化的標記結果。

5）吸掉染色工作液，用培養液洗蓋玻片2～3次，每次用預溫的培養基覆蓋所有細胞，孵育5～10min，然后吸走培養基。

4.顯微鏡檢測

1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiA濾光器的選擇參見(jiàn)下表：

2）多色染料的同時(shí)檢測，濾光器按照以下設定：

a)DiI和DiO＝OmegaXF52，Chroma51004；

b)DiI和DiD＝OmegaXF92，Chroma51007；

c)DiI，DiO和DiD＝OmegaXF93，Chroma61005；

5.流式細胞儀檢測

經(jīng)DiO，DiI，DiD和DiR染色的細胞分別用流式細胞儀的FL1，FL2，FL3或FL4通道檢測。

注意事項：

1.      經(jīng)碳菁類(lèi)染料（比如DiR）染色后的細胞能用多聚甲醛（PFA）固定，但不能用甲醇或其他溶劑的固定劑。染色能承受0.1% Triton X-100或0.1%毛地黃皂苷的透化處理，但會(huì )明顯增強胞內染色。

2.      經(jīng)碳菁類(lèi)染料（比如DiR）染色后的細胞不建議使用封片劑，因封片劑內的甘油或有機溶劑會(huì )溶解染料，引起增加的胞內染色和隨時(shí)間增加的高背景。建議直接在PBS或其他生理緩沖液內成像。使用PBS直接蓋上蓋玻片，然后四周用指甲油密封。

3.      熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

4.      為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

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