DiR Iodide (DiIC18(7)) 細胞膜深紅色熒光探針

【溫馨提示】：見(jiàn)我司整理的細胞膜熒光探針（Tracers for Membrane Labeling）產(chǎn)品專(zhuān)題 。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

DiI, DiO, DiD和DiR作為一類(lèi)長(cháng)鏈的親脂性二烷基碳菁類(lèi)染料（Dialkylcarbocyanines）熒光染料家族，用于標記細胞膜以及其他脂溶性生物結構。作為一類(lèi)環(huán)境敏感型熒光染料，當它們與膜結合或者與親脂性生物分子（例如蛋白質(zhì)，雖然在水中其熒光強度很弱）結合時(shí)，其熒光強度顯著(zhù)增強。一旦進(jìn)入細胞后，它們在細胞內質(zhì)膜中逐步擴散，于最佳濃度條件下可將整個(gè)細胞均勻染色。這些染料具很高的淬滅系數，偏光依賴(lài)性和很短的激發(fā)壽命。

四種染料呈現不同的熒光顏色，DiI（橙色熒光）、DiO（綠色熒光）、DiD（紅色熒光）、DiR（深紅色熒光），為活細胞多色彩熒光成像分析和流式細胞術(shù)提供了一種便捷的工具。DiO和DiI分別用標準FITC和TRITC濾光器檢測，可結合使用。DiD可被633 nm氦-氖（He-Ne）激光激發(fā)，具有比DiI更長(cháng)的激發(fā)和發(fā)射光波長(cháng)，特別適合用于標記具本底熒光的細胞和組織。而，DiR在體內活體成像或者示蹤中意義非凡，因其所發(fā)射的紅外光可以高效地穿過(guò)細胞和組織，并且在紅外光范圍內，其本底熒光水平很低。

本品以DiR的碘鹽形式提供，英文名：1,1-dioctadecyl-3,3,3,3

-tetramethylindotricarbocyaine iodide，純度≥95%，適用于熒光檢測研究。

基本特性：

1） 同義名：DiR Iodide; DiIC18(7);1,1-dioctadecyl-3,3,3,3-tetramethylindotricarbocyaine iodide;

2） 推薦濾光器：Omega-XF112, Chroma-41009

3） 分子式：C63H101IN2

4） 分子量：1013.39g/mol

5） 外觀(guān)：藍色至深藍色固體

6） 純度：≥95%（HPLC） 

7） Ex/Em：750/780 nm（甲醇）

8） 溶解性：溶于DMF，DMSO，甲醇

保存條件: 

-20oC避光干燥保存，有效期二年。

產(chǎn)品使用：

【注意】以下使用方法僅用作參考，可根據具體的實(shí)驗條件做出調整。

1. 染色液制備

1）儲存液制備：用DMSO或乙醇配置濃度1～5 mM的儲存液。例如，取25mg DiR（Mw：1013.39g/mol）溶于4.93ml無(wú)水DMSO中，充分溶解，即得到5mM的儲存液。

【注意】未使用的儲存液分裝儲存在-20℃，避免反復凍融，且要避光保存。

2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無(wú)血清培養基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，調整到1～5 μM的工作濃度。

【注意】工作液最終濃度需要根據不同細胞系和實(shí)驗體系來(lái)優(yōu)化。建議從推薦濃度開(kāi)始，以10倍范圍為區間進(jìn)行最優(yōu)濃度的摸索。

2. 懸浮細胞染色

1）加入適當體積的染色工作液重懸細胞，使其密度為1×10⁶/mL。

2）37℃孵育細胞2～20min，不同的細胞最佳培養時(shí)間不同?？梢?span>20min作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化以保證得到均一化的標記結果。

3）孵育結束，按1000～1500 rpm離心5min。

4）去除上清液，之后輕柔加入37℃預熱的生長(cháng)培養液重懸細胞。

5）再重復3），4）步驟兩次。

3. 貼壁細胞染色

1）將貼壁細胞培養于無(wú)菌蓋玻片上。

2）從培養基中移走蓋玻片，濾掉過(guò)量培養液，將蓋玻片放在潮濕的小室內。

3）在蓋玻片的一角加入100μL的染色工作液，輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細胞。

4）37℃孵育細胞2～20min，不同的細胞最佳培養時(shí)間不同?？梢?span>20min作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化以保證得到均一化的標記結果。

5）吸掉染色工作液，用培養液洗蓋玻片2～3次，每次用預溫的培養基覆蓋所有細胞，孵育5～10min，然后吸走培養基。

4. 顯微鏡檢測

1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見(jiàn)下表：

2）多色染料的同時(shí)檢測，濾光器按照以下設定：

a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；

b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；

c) DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005；

5. 流式細胞儀檢測

經(jīng)DiO，DiI，DiD和DiR染色的細胞分別用流式細胞儀的FL1，FL2，FL3或FL4通道檢測。

注意事項：

1.      熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2.      為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

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