Invivogen ant-bl-1  Blasticidin solution（10mg/ml）

Invivogen原裝產(chǎn)品，現貨供應。

基本介紹：

Blasticidin S（殺稻瘟菌素），也稱(chēng)為稻瘟散，滅瘟素S鹽酸鹽，從灰色鏈霉菌Streptomyces griseochromogenes分離到的一種核苷肽類(lèi)抗生素。

作用機制：主要通過(guò)干擾核糖體中肽鍵的形成來(lái)特異性抑制原核和真核細胞的蛋白質(zhì)合成。

Blasticidin S用于篩選攜帶bsr或BSD基因的轉染細胞。殺稻瘟菌素S具有快速而強效的作用模式，一個(gè)星期內完成陽(yáng)性克隆的篩選，且很低的抗生素濃度便能導致細胞迅速死亡。

抗性基因：

三種殺稻瘟菌素抗性基因已被克隆且測序：一種是乙酰轉移酶基因，來(lái)自殺稻瘟菌素產(chǎn)生菌的bls基因；另外兩種是脫氨酶基因（deaminase genes），分別為來(lái)自bacillus cereus蠟樣芽孢桿菌的bsr基因，和來(lái)自Aspergillus terreus土曲霉的BSD基因。bsr和BSD基因是最主要的選擇性標記基因，用于哺乳動(dòng)物和植物細胞的轉基因實(shí)驗。雖然bsr和BSD基因多用于哺乳動(dòng)物細胞的篩選標記，但也可以用于E. Coli。

篩選濃度：

A、大腸桿菌（E. Coli）【常用濃度：25-100μg/ml】

E. Coli對Blasticidin敏感性很弱，但含Blasticidin抗性的轉化子可在低鹽LB固體培養基（pH 8.0），100μg/ml Blasticidin的條件下進(jìn)行篩選。高pH可增強抗生素篩選活性，為了達到最佳效果，推薦使用Invivogen公司的Fast-Media?Blas培養基聯(lián)合篩選。

B、哺乳動(dòng)物（Mammalian Cells）【常用濃度：1-10μg/ml】

哺乳動(dòng)物細胞系Blasticidin的常用工作濃度范圍1-10μg/ml，少數情況高達30μg/ml。初次實(shí)驗建議通過(guò)滅殺曲線(xiàn)來(lái)確定最佳使用濃度。

某些細胞系用Blasticidin進(jìn)行篩選的建議濃度：

實(shí)驗步驟：

1）Blasticidin S通常使用濃度為1-10μg/ml，初次實(shí)驗建議通過(guò)滅殺曲線(xiàn)來(lái)確定最佳使用濃度。

2）轉染48h后，用含適宜濃度Blasticidin S的新鮮培養基將細胞傳代；（注：細胞處于活躍分裂期時(shí)抗生素工作最好。細胞密度太高，抗生素效率降低。分盤(pán)時(shí)覆蓋率最好不超過(guò)25%）

3）每3-4天去除培養基，加入含相同濃度Blasticidin的新鮮培養基；

4）7天后檢測細胞集落形成。根據宿主細胞種類(lèi)和轉染/篩選效率，集落形成可能需要再增加一周或更久。

5）轉移5-10個(gè)抗性克隆到35mm細胞培養盤(pán)。加入選擇培養基維持培養7天，再進(jìn)行后續實(shí)驗。

質(zhì)量控制：

濃度10mg/ml，每一批次都經(jīng)過(guò)嚴格檢測，確保每一批次間產(chǎn)品質(zhì)量連續穩定。

純度：≥ 95% (HPLC)
內毒素水平：<1 EU/mg
理化特性：pH7.5, 透明
細胞培養檢測：用Blasticidin敏感和Blasticidin抗性哺乳動(dòng)物細胞系檢測產(chǎn)品活性
無(wú)細胞毒性痕量污染物：長(cháng)期培養Blasticidin抗性細胞確認無(wú)細胞毒性 

保存：

4°C短期或-20°C長(cháng)期保存，避免反復凍融。