NBS5918 Coelenterazine Native 天然腔腸素
貨號：NBS5918-500ug；
NBS5918-1mg；
NBS5918-5mg；
NBS5918-10mg
品牌：NoninBio
Coelenterazine Native 天然腔腸素
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 包裝規格 | 價(jià)格 |
NBS5918-500ug | Coelenterazine Native 天然腔腸素 | 500ug | 748 |
NBS5918-1mg | Coelenterazine Native 天然腔腸素 | 2x500ug | 1285 |
NBS5918-5mg | Coelenterazine Native 天然腔腸素 | 5mg | 4698 |
NBS5918-10mg | Coelenterazine Native 天然腔腸素 | 10mg | 7823 |
【溫馨提示】：見(jiàn)我司提供的活體成像底物-腔腸素及衍生物產(chǎn)品專(zhuān)題。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
腔腸素（Coelenterazine）是在水生生物中發(fā)現的一種發(fā)光基團（luminophore），是許多熒光素酶的作用底物，包括海腎熒光素酶（Renilla reniformis luciferase, Rluc），分泌型膜錨定熒光素酶（Gaussia luciferase, Gluc）和藪枝蟲(chóng)熒光素酶（Obelia luciferase），和發(fā)光蛋白包括水母發(fā)光蛋白（Aequorin）的構成之一。其作用原理是以腔腸素為底物的熒光素酶，在含分子氧的條件下，氧化腔腸素產(chǎn)生高能量的中間產(chǎn)物，在此過(guò)程發(fā)射藍色光，光波長(cháng)在450~480nm。而甲蟲(chóng)（或螢火蟲(chóng)）熒光素/熒光素酶（FLuc）系統不同，其在含分子氧的條件下，還需要ATP和Mg2+的存在才能同時(shí)發(fā)光，光波長(cháng)在550-570nm。正由于生物發(fā)光信號和底物的差異，RLuc常常與FLuc聯(lián)合用于多重轉錄報告基因研究，或用作Fluc系統內螢火蟲(chóng)熒光素酶轉染的內參。
腔腸素應用甚是廣泛，包括：1）活細胞或組織的鈣離子檢測；2）細胞或組織的超氧化物和過(guò)氧亞硝基陰離子（活性氧，ROS）化學(xué)發(fā)光檢測；3）基因報告基因檢測；4）動(dòng)物活體檢測；5）ELISA和生物發(fā)光共振能量轉移（BRET）用于蛋白相互作用研究；6）藥物高通量篩選（HTS）。
天然腔腸素（Coelenterazine Native）是自然界中存在最豐富的一種腔腸素，也是目前應用最普遍的一種標準底物。不僅是天然水母發(fā)光蛋白復合物的發(fā)光基團，也是海腎熒光素酶（Rluc）和分泌型膜錨定熒光素酶（Gluc）等的作用底物。還可用于生物共振能量轉移BRET，細胞或組織內的超氧陰離子和過(guò)氧化亞硝基陰離子水平（ROS）的化學(xué)發(fā)光檢測。
產(chǎn)品特性：
1） CAS NO：55779-48-1
2） 化學(xué)名：8-benzyl-6-(4-hydroxyphenyl)-2-[(4-hydroxyphenyl)methyl] -7H-imidazo [1,2-a]pyrazin-3-one
3） 同義名：Coelenterazine, nativ; native Coelenterazine; Coelenterazine free base; 腔腸素游離酸；
4） 分子式：C26H21N3O3
5） 分子量：423.46 g/mol
6） 純度：>95%
7） 外觀(guān)：黃色至棕黃色結晶性粉末
8） 溶解性：溶于甲醇或乙醇，不要溶于DMSO
9）化學(xué)結構圖：
保存條件:
-20℃干燥避光保存，且保存于惰性氣體內。至少一年有效。
產(chǎn)品使用：
一、 腔腸素工作液制備
【有關(guān)腔腸素溶解的注意事項】：
1）腔腸素溶于甲醇或乙醇，不可溶于DMSO。腔腸素的水溶性相對比較低，一般情況需先將腔腸素溶于酸化的醇類(lèi)溶劑配成相對高濃度的母液，然后再用水溶性緩沖液稀釋到需要的工作液，現配現用。
2）腔腸素在溶液中的穩定性比較低，最好于正式實(shí)驗前才配制溶液（包括高濃度母液）。但若實(shí)際要求，必須保存母液，目前來(lái)說(shuō)最穩定的溶劑是丙二醇，往內加入少量L-抗壞血酸，β-巰基乙醇，DTT，DTE，或少量HCl能維持其還原態(tài)。不過(guò)，還原劑可能會(huì )減低氧化腔腸素（氧化為Coelenteramide）的動(dòng)力學(xué)速率。也有可能破壞熒光素酶活性。而凍存在醇類(lèi)溶劑中可能引起腔腸素沉淀，實(shí)際取決于溶液濃度。當然，可通過(guò)加熱50-60℃，使得沉淀重新溶解。必須確保無(wú)可見(jiàn)沉淀，或在實(shí)驗前（特別是活體動(dòng)物）離心去沉淀。
1.1 腔腸素母液制備
將低溫保存的腔腸素粉末置于室溫回溫至少20min，低速離心后。往500μg天然腔腸素內加入98μl 酸化的甲醇溶液（100%甲醇中含有20μl/ml 3M或者6M HCl），配制成12mM（~5mg/ml）腔腸素母液。≤-20℃（最好-80℃）分裝避光保存，可能會(huì )有少量活性的喪失，約保存4周。若存放在惰性氣體內科延長(cháng)保存周期。
1.2 腔腸素工作液制備
直接用去氣蒸餾水（degased distilled water），PBS或者其他類(lèi)型生理緩沖液稀釋?，F配現用?？芍苯佑貌缓?span>Ca2+/Ma2+的PBS將12 mM的儲存液稀釋到2mM（~1 mg/ml）的工作液，+4°C避光短暫存放。若是體外實(shí)驗，需要使用前回至室溫。
附錄1 天然腔腸素及其衍生物的光譜特性：
產(chǎn)品名稱(chēng) | 產(chǎn)品編號 | Em (nm) | RLC[1] | Relative Intensity[2] | Half-rise time (ms) [3] |
466 | 1.00 | 1 | 6-30 | ||
466 | 0.75 | 16 | 6-30 | ||
400 | / | / | / | ||
405&465 | 0.5 | 4 | 0.15-0.3 | ||
472 | 0.80 | 20 | 6-30 | ||
442 | 0.63 | 28 | 2-5 | ||
445 | 0.65 | 500 | 2-5 | ||
468 | 0.25 | 0.15 | 6-30 | ||
[1] RLC = relative luminescence capacity: Total time-integrated emission of aequorin in saturating Ca2+relative to native aequorin = 1.0. [2] Ratio of the luminescence of aequorin reconstituted with coelenterazine analog relative to native aequorin at 100 nM Ca2+. [3] Half-Rise Time: The half-rise time is the time for the luminescence signal to reach 50% of the maximum after addition of 1 mM Ca2+to a standard of aequorin reconstituted with the coelenterazine analog of interest. All data are from O. Shimomura in Cell Calcium 14, 373 (1993). | |||||
附錄2天然腔腸素及其衍生物的應用差異：
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 應用特征 |
應用非常廣泛的標準底物。腔腸素是天然水母發(fā)光蛋白復合物的發(fā)光基團，也是海腎熒光素酶（Rluc）的底物。底物的快速再生（fast regeneration）比較重要的實(shí)驗推薦使用天然腔腸素。 1）生物發(fā)光檢測鈣離子的靈敏度非常高，檢測范圍從0.1μM到＞100μM；2）使用腔腸素監測報告基因表達是其主要應用；3）其他應用包括生物共振能量轉移BRET，化學(xué)發(fā)光檢測細胞或組織內的超氧陰離子和過(guò)氧化亞硝基陰離子水平（ROS）； | ||
1）腔腸素h形成的水母發(fā)光蛋白復合物比天然腔腸素復合物的光強度高10倍以上；2）比天然腔腸素對鈣離子敏感度更高；3）也適用報告基因分析。 | ||
也稱(chēng)為DeepBlue C，是一種腔腸素衍生物，用作海腎熒光素酶Rluc的底物，發(fā)射峰約400nm。含GFP受體的BRET研究是Rluc的首選底物，因其對GFP受體的發(fā)射波干擾非常小。不可用作Gluc底物。 | ||
體外水母發(fā)光蛋白再生中腔腸素e的速度最高，具有雙發(fā)射峰，分別為405nm和465nm，使其能在pCa 5-7范圍內通過(guò)雙發(fā)射峰熒光強度比率的方式測定Ca2+濃度，提高檢測準確度。但由于滲透性差，不適合胞內應用。在溶液中穩定性差。 | ||
腔腸素f形成的水母發(fā)光蛋白復合物的光強度是天然腔腸素復合物的20倍，最大發(fā)射波長(cháng)約長(cháng)8nm。具有最好的細胞滲透性。當需要具極高鈣離子Ca2+靈敏度的水母發(fā)光蛋白復合物，建議用腔腸素f。 | ||
Coelenterazine cp產(chǎn)生水母發(fā)光蛋白復合物的光強度是天然腔腸素復合物的15倍，且具有更快的Ca2+反應性。 | ||
其生物發(fā)光強度最高（腔腸素hcp形成水母發(fā)光蛋白復合物的熒光強度比天然腔腸素復合物高190倍），對Ca2+反應速度快。 | ||
腔腸素fcp形成的水母發(fā)光蛋白復合物的光強度是天然腔腸素復合物的135倍。 | ||
所有的腔腸素衍生物中熒光強度最弱，對Ca2+反應時(shí)間明顯慢于天然腔腸素。一種非常有用的低靈敏腔腸素。 | ||
體外腔腸素i水母發(fā)光蛋白復合物的熒光強度僅為天然腔腸素復合物的3%，在所有腔腸素衍生物種對鈣離子的反應時(shí)間最慢。 | ||
體外腔腸素ip水母發(fā)光蛋白復合物的熒光強度幾乎比天然腔腸素復合物高50倍，但對鈣離子的反應時(shí)間比天然腔腸素慢。 | ||
非常優(yōu)越的抗氧化劑，靶向細胞內來(lái)源于單態(tài)氧和超氧化物陰離子產(chǎn)生的活性氧物質(zhì)（ROS）。 |
注意事項：
1. 腔腸素（Coelenterazine， CTZ）最好以完全凍干粉的狀態(tài)保存在惰性氣體內，密封后置于-20℃或-70℃長(cháng)期避光保存。管內即使有微量空氣，也會(huì )隨著(zhù)時(shí)間慢慢氧化腔腸素使其活性喪失。由此，不同組間的定量結果可能顯得不可靠，數據可比性不高。
2. 腔腸素（Coelenterazine， CTZ）不建議以?xún)Υ嬉旱男问奖４?，最好于?shí)驗前配制新鮮的溶液。不建議將配好的腔腸素溶液儲存在-20℃或-70℃，因其具有一個(gè)高能量的二氧雜環(huán)丁酮環(huán)形結構，即使在低溫條件下都會(huì )自發(fā)降解。若是必須配成液體儲存液，請按照操作步驟一、腔腸素工作液制備執行。
3. 體內動(dòng)物實(shí)驗，推薦使用我司特別開(kāi)發(fā)和優(yōu)化的注射用天然腔腸素（Injectable native Coelenterazine）（貨號：NBS5919）或注射用腔腸素h（Injectable h-Coelenterazine）（貨號：NBS5921）。
4. 商業(yè)化腔腸素的種類(lèi)繁多，有天然腔腸素，以及各種腔腸素衍生物（比如，腔腸素h，腔腸素400a，腔腸素e，腔腸素f，腔腸素hcp）。它們對鈣離子的親和力，光譜特性，以及應用傾向上會(huì )有差異，詳見(jiàn)附錄1—天然腔腸素及其衍生物的光譜特性，附錄2—天然腔腸素及其衍生物的應用差異選擇適當的產(chǎn)品。
5. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。
公司名稱(chēng)：上海諾寧生物科技有限公司
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