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NBS5919 Injectable native Coelenterazine 注射用天然腔腸素

欄目：NoninBio
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Injectable native Coelenterazine 注射用天然腔腸素
貨號：NBS5919-1mg；
NBS5919-10mg
品牌：NoninBio

 

Injectable native Coelenterazine 注射用天然腔腸素

 

產(chǎn)品編號

產(chǎn)品名稱(chēng)

包裝規格

價(jià)格

NBS5919-1mg

Injectable native Coelenterazine 注射用天然腔腸素

2x500ug

2248

NBS5919-10mg

Injectable native Coelenterazine 注射用天然腔腸素

20x500ug

18623

【溫馨提示】：見(jiàn)我司提供的活體成像底物-腔腸素及衍生物產(chǎn)品專(zhuān)題。 

 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

腔腸素（Coelenterazine）是在水生生物中發(fā)現的一種發(fā)光基團（luminophore），是許多熒光素酶的作用底物，包括海腎熒光素酶（Renilla reniformis luciferase, Rluc），分泌型膜錨定熒光素酶（Gaussia luciferase, Gluc）和藪枝蟲(chóng)熒光素酶（Obelia luciferase），和發(fā)光蛋白包括水母發(fā)光蛋白（Aequorin）的構成之一。其作用原理是以腔腸素為底物的熒光素酶，在含分子氧的條件下，氧化腔腸素產(chǎn)生高能量的中間產(chǎn)物，在此過(guò)程中發(fā)射藍色光，光波長(cháng)在450~480nm。而甲蟲(chóng)（或螢火蟲(chóng)）熒光素/熒光素酶（FLuc）系統不同，其在含分子氧的條件下，還需要ATP和Mg2+的存在才能同時(shí)發(fā)光，光波長(cháng)在550-570nm。正由于生物發(fā)光信號和底物的差異，RLuc常常與FLuc聯(lián)合用于多重轉錄報告基因研究，或用作Fluc系統內螢火蟲(chóng)熒光素酶轉染的內參。

腔腸素應用甚是廣泛，包括：1）活細胞或組織的鈣離子檢測；2）細胞或組織的超氧化物和過(guò)氧亞硝基陰離子（活性氧，ROS）化學(xué)發(fā)光檢測；3）基因報告基因檢測；4）動(dòng)物活體檢測；5）ELISA和生物發(fā)光共振能量轉移（BRET）用于蛋白相互作用研究；6）藥物高通量篩選（HTS）。

天然腔腸素（Coelenterazine Native）是自然界中存在最豐富的一種腔腸素，也是目前應用最普遍的一種標準底物。不僅是天然水母發(fā)光蛋白復合物的發(fā)光基團，也是海腎熒光素酶（Rluc）和分泌型膜錨定熒光素酶（Gluc）等的作用底物。還可用于生物共振能量轉移BRET，細胞或組織內的超氧陰離子和過(guò)氧化亞硝基陰離子水平（ROS）的化學(xué)發(fā)光檢測。

本品為專(zhuān)供體內成像研究的注射用天然腔腸素（Injectable native Coelenterazine），不僅含有超純的天然腔腸素（＞99%），還提供特別設計的Inject-Diluent溶劑，能夠最大程度的溶解腔腸素，從而最小化體內注射體積。另外，與傳統乙醇溶解的腔腸素相比，用Inject-Diluent溶解的腔腸素能得到更好的熒光信號。

 

保存條件: 

-20℃干燥避光保存，且保存于惰性氣體內。至少一年有效。

 

產(chǎn)品組成：

組分

名稱(chēng)

規格

NBS5919-1mg

NBS5919-10mg

NBS5919-A

Native Coelenterazine

2×500μg

20×500μg

NBS5919-B

Inject-Diluent

1×500μl

10×500μl

 

產(chǎn)品使用：

1．使用裝有23 gauge或更小針頭的0.5-1.0ml注射器，吸取150μl 溫熱（35-50℃）的Inject-Diluent。

2．將150μl Inject-Diluent打入Native Coelenterazine瓶?jì)?，使用針頭和注射器上下吸打或低速渦旋，直至看到完全透明溶液，此時(shí)得到腔腸素溶液濃度為3.33mg/ml。如果溶液沒(méi)有完全透明，用水浴鍋或加熱板在60-80℃加熱幾分鐘，檢查完全透明。

3．按下表1，用胰島素注射器吸取15-75μl充分溶解的腔腸素溶液（3.33mg/ml），通過(guò)尾靜脈注射到動(dòng)物體內。檢查，排氣，沖洗針頭。使用胰島素注射器的優(yōu)勢在于很低的液體滯留體積（＜2μl）。緩慢注射。

建議按照表1單只小鼠（25g體重）的腔腸素溶液（3.33mg/ml）注射劑量表

需要的底物質(zhì)量

腔腸素溶液注射體積

50μg

15μl

100μg

30μl

200μg

60μl

250μg

75μl

【注意：分泌型膜錨定熒光素酶（Gluc）比其他熒光素酶強許多倍，具有更高的Km值，因此需要更多的腔腸素底物來(lái)達到理想的信號值。天然腔腸素是唯一的底物能用于分泌型膜錨定熒光素酶。建議每只25g體重的小鼠，使用100-200μg腔腸素。往每只25g小鼠內注射的液體量不要超過(guò)70-80μl。若需要更高底物，可提高腔腸素溶液的濃度?！?/span>

 

附錄1 天然腔腸素及其衍生物的光譜特性：

產(chǎn)品名稱(chēng)

產(chǎn)品編號

Em (nm)

RLC[1]

Relative Intensity[2]

Half-rise time (ms) [3]

Coelenterazine native

NBS5918

466

1.00

1

6-30

Coelenterazine h

NBS5920

466

0.75

16

6-30

Coelenterazine 400 a

NBS5922

400

/

/

/

Coelenterazine e

NBS5923

405&465

0.5

4

0.15-0.3

Coelenterazine f

NBS5924

472

0.80

20

6-30

Coelenterazine cp

NBS5925

442

0.63

28

2-5

Coelenterazine hcp

NBS5926

445

0.65

500

2-5

Coelenterazine n

NBS5928

468

0.25

0.15

6-30

[1] RLC = relative luminescence capacity: Total time-integrated emission of aequorin in saturating Ca2+relative to native aequorin = 1.0. 

[2] Ratio of the luminescence of aequorin reconstituted with coelenterazine analog relative to native aequorin at 100 nM Ca2+.

[3] Half-Rise Time: The half-rise time is the time for the luminescence signal to reach 50% of the maximum after addition of 1 mM Ca2+to a standard of aequorin reconstituted with the coelenterazine analog of interest.

All data are from O. Shimomura in Cell Calcium 14, 373 (1993).

附錄2天然腔腸素及其衍生物的應用差異：

產(chǎn)品編號

產(chǎn)品名稱(chēng)

應用特征

NBS5918

Coelenterazine native

應用非常廣泛的標準底物。腔腸素是天然水母發(fā)光蛋白復合物的發(fā)光基團，也是海腎熒光素酶（Rluc）的底物。底物的快速再生（fast regeneration）比較重要的實(shí)驗推薦使用天然腔腸素。

1）生物發(fā)光檢測鈣離子的靈敏度非常高，檢測范圍從0.1μM到＞100μM；2）使用腔腸素監測報告基因表達是其主要應用；3）其他應用包括生物共振能量轉移BRET，化學(xué)發(fā)光檢測細胞或組織內的超氧陰離子和過(guò)氧化亞硝基陰離子水平（ROS）；

NBS5920

Coelenterazine h

1）腔腸素h形成的水母發(fā)光蛋白復合物比天然腔腸素復合物的光強度高10倍以上；2）比天然腔腸素對鈣離子敏感度更高；3）也適用報告基因分析。

NBS5922

Coelenterazine 400 a

也稱(chēng)為DeepBlue C，是一種腔腸素衍生物，用作海腎熒光素酶Rluc的底物，發(fā)射峰約400nm。含GFP受體的BRET研究是Rluc的首選底物，因其對GFP受體的發(fā)射波干擾非常小。不可用作Gluc底物。

NBS5923

Coelenterazine e

體外水母發(fā)光蛋白再生中腔腸素e的速度最高，具有雙發(fā)射峰，分別為405nm和465nm，使其能在pCa 5-7范圍內通過(guò)雙發(fā)射峰熒光強度比率的方式測定Ca2+濃度，提高檢測準確度。但由于滲透性差，不適合胞內應用。在溶液中穩定性差。

NBS5924

Coelenterazine f

腔腸素f形成的水母發(fā)光蛋白復合物的光強度是天然腔腸素復合物的20倍，最大發(fā)射波長(cháng)約長(cháng)8nm。具有最好的細胞滲透性。當需要具極高鈣離子Ca2+靈敏度的水母發(fā)光蛋白復合物，建議用腔腸素f。

NBS5925

Coelenterazine cp

Coelenterazine cp產(chǎn)生水母發(fā)光蛋白復合物的光強度是天然腔腸素復合物的15倍，且具有更快的Ca2+反應性。

NBS5926

Coelenterazine hcp

其生物發(fā)光強度最高（腔腸素hcp形成水母發(fā)光蛋白復合物的熒光強度比天然腔腸素復合物高190倍），對Ca2+反應速度快。

NBS5927

Coelenterazine fcp

腔腸素fcp形成的水母發(fā)光蛋白復合物的光強度是天然腔腸素復合物的135倍。

NBS5928

Coelenterazine n

所有的腔腸素衍生物中熒光強度最弱，對Ca2+反應時(shí)間明顯慢于天然腔腸素。一種非常有用的低靈敏腔腸素。

NBS5929

Coelenterazine i

體外腔腸素i水母發(fā)光蛋白復合物的熒光強度僅為天然腔腸素復合物的3%，在所有腔腸素衍生物種對鈣離子的反應時(shí)間最慢。

NBS5930

Coelenterazine ip

體外腔腸素ip水母發(fā)光蛋白復合物的熒光強度幾乎比天然腔腸素復合物高50倍，但對鈣離子的反應時(shí)間比天然腔腸素慢。

NBS5932

Methyl Coelenterazine

非常優(yōu)越的抗氧化劑，靶向細胞內來(lái)源于單態(tài)氧和超氧化物陰離子產(chǎn)生的活性氧物質(zhì)（ROS）。

 

注意事項：

1.      本品特別開(kāi)發(fā)適用于體內實(shí)驗。若僅做體外實(shí)驗，可使用我司提供的天然腔腸素（Coelenterazine Native）（貨號：NBS5918）或腔腸素h（Coelenterazine h）（貨號：NBS5920）。

2.      商業(yè)化腔腸素的種類(lèi)繁多，有天然腔腸素，以及各種腔腸素衍生物（比如，腔腸素h，腔腸素400a，腔腸素e，腔腸素f，腔腸素hcp）。它們對鈣離子的親和力，光譜特性，以及應用傾向上會(huì )有差異，詳見(jiàn)附錄1—天然腔腸素及其衍生物的光譜特性，附錄2—天然腔腸素及其衍生物的應用差異選擇適當的產(chǎn)品。

3.      為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。