JC-1 (Powder) 線(xiàn)粒體膜電位熒光探針（粉末）

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

JC-1是一種廣泛用于檢測線(xiàn)粒體膜電△Ψm位的理想熒光探針。JC-1染料以電勢依賴(lài)性的方式積聚在線(xiàn)粒體內，可以用來(lái)檢測細胞、組織或純化的線(xiàn)粒體膜電位。正常線(xiàn)粒體內，JC-1聚集在線(xiàn)粒體基質(zhì)中形成聚合物，聚合物發(fā)出強烈的紅色熒光（Ex=585 nm, Em=590 nm）；不健康的線(xiàn)粒體由于膜電位的下降或喪失，JC-1只能以單體的形式存在于胞漿中，產(chǎn)生綠色熒光（Ex=514 nm, Em=529 nm）。

JC-1不僅可用于定性檢測，因顏色的變化可以非常直接的反映出線(xiàn)粒體膜電位的變化。也可以用于定量檢測，因線(xiàn)粒體的去極化程度可以通過(guò)紅/綠熒光強度的比例來(lái)衡量。觀(guān)察時(shí)，只需使用常規的觀(guān)察紅色熒光和綠色熒光的設置即可。
    本品以?xún)龈煞坌问教峁?，CAS NO.3520-43-2 ，細胞培養級。用于檢測細胞的線(xiàn)粒體膜電位時(shí)常用的濃度范圍為1～20 μg/ml，對于很多細胞適宜采用的工作濃度為10 μg/ml。

產(chǎn)品特性

1） CAS NO：3520-43-2 

2） 化學(xué)名：5,5‘,6,6’-Tetrachloro-1,1‘,3,3’-tetraethylbenzimidazolylcarbocyanine iodide

3） 分子式：C₂₅H₂₇Cl₄IN₄

4） 分子量：652.23 g/mol

5）  純度：＞95%（HPLC）

6）  外觀(guān)：紅褐色粉末

7）  溶解性：溶于DMSO、DMF，幾乎不溶于水

8）  Ex/Em：?jiǎn)误w形式（monomer form）：Ex=514 nm, Em=529 nm；

              聚合物形式（J-aggregate form）：Ex=585 nm, Em=590 nm；

保存條件: 

-20℃干燥避光保存，2年有效。

產(chǎn)品使用：

1. 染色工作液制備

1）JC-1儲存液制備：將JC-1粉末室溫回溫20min左右，直接加1ml無(wú)水DMSO到5mg粉末，顛倒混勻，使其充分溶解后，即得到5mg/ml的儲存液。溶液?jiǎn)未斡昧糠盅b存于-20℃，避光干燥且避免反復凍融。

2）JC-1工作液制備：將凍存的儲存液置于室溫充分融化，之后用緩沖液或者預熱的培養基直接稀釋儲存液（5 mg/ml）到需要的工作濃度，邊震蕩邊稀釋?zhuān)浞只靹?。為了去除任何不溶顆粒，建議13,000 x g離心工作液1 min，小心吸取上清轉移到新的管子內。整個(gè)過(guò)程要避光操作。

【注意】：因JC-1不溶于水，很可能在稀釋到工作液的過(guò)程中形成聚集顆粒，建議細胞染色前用離心或者過(guò)濾的方法去除這些顆粒后再使用。

2. JC-1染色步驟（流式細胞儀）

1）于6-，12或24-孔板上進(jìn)行細胞鋪板，調整密度為5×10⁵cells/ml。37℃，5% CO₂培養箱培養過(guò)夜。選擇合適的化合物根據特定的步驟進(jìn)行凋亡誘導?！咀⒁狻浚哼M(jìn)行凋亡誘導時(shí)的細胞密度建議不超過(guò)1×10⁶cells/ml，也可根據自己的細胞類(lèi)型培養至合適的密度。

2）取0.5 ml細胞懸液至無(wú)菌的離心管內；

3）室溫條件400 x g離心5 min；吸掉上清。

4）用0.5 ml JC-1工作液重懸細胞，于37℃，5% CO₂培養箱孵育15-30 min；【注意】：一般情況，15 min足以進(jìn)行充分的染色。

5）室溫條件400 x g離心5 min；吸掉上清；

6）用2 ml細胞培養液或者緩沖液重懸細胞，之后室溫條件400 x g離心5 min；吸掉上清；

7）重復步驟6）；

8）用0.5 ml新鮮培養液或者緩沖液重懸細胞，即可進(jìn)行后續的流式分析?！咀⒁狻浚赫堮R上進(jìn)行流式定量分析，此細節很重要。

數據分析：含有紅色JC-1聚集物的健康細胞線(xiàn)粒體用FL2通道檢測；含有綠色JC-1單體的凋亡或不健康細胞用FL1（FITC）通道檢測。

3. JC-1染色步驟（熒光顯微鏡）

A、懸浮細胞

1）-6）同上JC-1染色步驟（流式細胞儀）；

7）用0.3 ml緩沖液重懸細胞，即可進(jìn)行熒光顯微鏡檢測?！咀⒁狻浚赫堮R上進(jìn)行熒光顯微分析，此細節重要。

 數據分析：

使用可同時(shí)檢測FITC/TRITC或者FITC/Texas RedTM的雙帶帶通濾波器進(jìn)行檢測。健康細胞因JC-1聚集后線(xiàn)粒體呈紅色，最大發(fā)射波長(cháng)為590 nm。而凋亡/壞死細胞內的JC-1以單體形式存在，線(xiàn)粒體呈綠色，最大發(fā)射波長(cháng)為530 nm。

B、貼壁細胞

1）培養皿內用蓋玻片進(jìn)行細胞爬片或者細胞培養在腔室玻片（chamber slide）上。選擇合適的化合物根據特定的步驟進(jìn)行凋亡誘導。

2）染色前開(kāi)始配制JC-1工作液，配制步驟見(jiàn)上。

3）吸掉細胞培養液，然后加入足夠覆蓋所有細胞的JC-1工作液。于37℃，5% CO₂培養箱孵育15-30 min；【注意】：一般情況，15 min足以進(jìn)行充分的染色。

4）吸掉培養液，然后用合適的緩沖液清洗細胞2次。

5）加入2ml細胞培養液（培養液可含血清和酚紅）或者PBS緩沖液，于熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下觀(guān)察。數據分析同A.懸浮細胞。

4. JC-1染色步驟（熒光酶標儀）

1）-7）同上JC-1染色步驟（流式細胞儀）；

8）用0.3 ml緩沖液重懸細胞；然后按照每孔0.1 ml的量將染色好的細胞轉移到黑色的96孔板內，即可進(jìn)行熒光酶標板分析?！咀⒁狻浚赫堮R上進(jìn)行熒光顯微分析，此細節重要。

 數據分析：

健康細胞，JC-1單體聚集形成聚合物，線(xiàn)粒體呈現強烈的紅色熒光（激發(fā)波長(cháng)550 nm，發(fā)射波長(cháng)600 nm）。而凋亡或壞死細胞內JC-1以單體形式存在，線(xiàn)粒體呈強烈的綠色熒光（激發(fā)波長(cháng)485 nm,發(fā)射波長(cháng)535nm）。之后計算紅色熒光信號與綠色熒光信號的比值，用來(lái)判斷細胞健康程度。

注意事項：

1.      JC-1是光敏感性的，所有染色步驟的操作過(guò)程中避免強光接觸。

2.      JC-1染色完成后，立即進(jìn)行后續的結果分析非常必要。

3.      為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

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