臺盼藍染色液(0.4%)
0.4% Trypan Blue solution
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 包裝規格 |
NBS6274-50ml | 0.4% Trypan Blue solution 臺盼藍染色液(0.4%) | 50ml |
NBS6274-100ml | 0.4% Trypan Blue solution 臺盼藍染色液(0.4%) | 100ml |
NBS6274-500ml | 0.4% Trypan Blue solution 臺盼藍染色液(0.4%) | 500ml |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
臺盼藍(Trypan Blue,CAS NO. 72-57-1)是一種藍色酸性染料,含有兩個(gè)偶氮發(fā)色團。是一種較大、親水和四磺酸化的陰離子染料,普遍用于檢測細胞膜的完整性以及評估細胞的存活率。作為一種鑒定細胞存活的簡(jiǎn)易方法,臺盼藍滲透進(jìn)入喪失活性或細胞膜不完整的細胞將其染成藍色(通常認為細胞膜完整性喪失,即可認為細胞已經(jīng)死亡),而具有完整細胞膜的活細胞將染料排斥在外。因此,通過(guò)顏色的差異能肉眼直接區分死細胞和活細胞。
本品是0.4%臺盼藍染色液,使用方便,只需經(jīng)簡(jiǎn)單的染色,即可通過(guò)光學(xué)顯微鏡直接計數來(lái)鑒定細胞的存活情況。
保存條件:
2-8℃保存,1年有效。
使用方法:
1) 細胞收集
對于懸浮細胞:離心收集細胞,充分清洗后,用適當緩沖液如PBS、HBSS重懸,制備成單細胞懸液。若有需要,可做適當稀釋。
對于貼壁細胞:先用胰酶消化細胞,之后離心收集細胞,經(jīng)充分清洗后,再用適當緩沖液重懸,制備成單細胞懸液。若有需要,可做適當稀釋。
2) 臺盼藍染色
將細胞懸液與0.4%臺盼藍染色液按照9:1的比例稀釋?zhuān)p輕混勻后,室溫染色3min?!咀⒁狻浚阂话闱闆r染色3min足矣。某些情況可延長(cháng)染色時(shí)間,但不宜超過(guò)10min。
3) 細胞計數
吸取少量染色細胞到血球計數板內,于普通光鏡10×物鏡下計數四個(gè)大格內的細胞數,壓線(xiàn)者數上不數下,數左不數右,分別記錄著(zhù)色細胞(包括損傷細胞和死細胞)和未著(zhù)色細胞(活細胞)。
【注意】:用移液槍加樣,沿著(zhù)蓋玻片的邊緣輕輕加液使其完全覆蓋住整個(gè)小室。不宜過(guò)量或量太少。
【注意】:1mm2方格內細胞數目通??刂圃?span>20-50個(gè)。當細胞數目超過(guò)200個(gè),需重新調整稀釋倍數。
4) 結果分析
按照以下公式來(lái)計算細胞數目和活細胞百分比,
i)計算每ml細胞數目:細胞數 /ml= 1mm2大方格內的平均細胞數×稀釋倍數×104;
【注意】:此處的稀釋倍數即為步驟2)內的單細胞懸液與臺盼藍染色液混合后的稀釋倍數。
ii)總細胞數目:細胞總數 = (細胞數/ml) × 最初制備單細胞懸液的總體積
iii)細胞存活率(活細胞率):活細胞率(%)=(總細胞數目-總著(zhù)色細胞數)/總細胞數 × 100
【注意】:處于健康的對數生長(cháng)期細胞,通常情況活細胞至少占到95%。
注意事項:
1) 臺盼藍具有輕微的細胞毒性,操作過(guò)程中請注意防護,避免與身體的直接接觸。
2) 凋亡小體偶爾也有臺盼藍拒染現象。
3) 為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。