EZ poly?in vivo siRNA & DNA 活體轉染試劑

NoninBio轉 染 試 劑 對標產(chǎn)品列表

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

EZ poly?in vivo siRNA & DNA 活體轉染試劑是一款專(zhuān)用于體內的基因轉染試劑，可通過(guò)尾靜脈注射的方式將基因傳送至腫瘤部位。與其它體內轉染試劑相比，具有操作簡(jiǎn)便、體內毒性低、穩定性好、體內循環(huán)時(shí)間長(cháng)、靶向性好等優(yōu)點(diǎn)。

應用范圍:

EZ poly?in vivo siRNA & DNA 活體轉染試劑可適用于眾多動(dòng)物腫瘤模型?？蓴y帶熒光標記基因、治療基因等到達腫瘤部位，并在腫瘤部位蓄積和表達。特別適用于各種常規腫瘤模型如HeLa、B16F10、MCF-7、 MDA-MB-231和A549等，均可得到較高的轉染效率，且重復性好。

保存條件: 

2-8℃保存一年

運輸：

常溫運輸

體內轉染方法:

以體重為20g的荷瘤鼠為例，請參考表1的轉染規模調整，步驟如下:

*DNA濃度可自行調整，總量等于20μg即可

體內轉染條件的優(yōu)化:

可通過(guò)改變腫瘤體積的大小、基因的用量和濃度以及EZ poly?in vivo siRNA & DNA 活體轉染試劑濃度對體內轉染進(jìn)行優(yōu)化。保證腫瘤體積在50mm³~200mm³最佳，EZ poly?in vivo siRNA & DNA 活體轉染試劑(μL): DNA (μg)可以在2:1和0.5:1之間調整；EZ poly?in vivo siRNA & DNA 活體轉染試劑(μL): siRNA(nmol)可以在10:1和 20:1 之間調整。瘤內基因蓄積建議在注射后24小時(shí)檢測，瘤內基因表達建議在注射后48小時(shí)檢測。

         表1.  不同體重鼠的體內用量推薦

一：轉染效率低

影響細胞轉染效率的因素有很多。首先，與所轉染細胞有關(guān)，有的細胞容易轉染，如HeLa、B16F10、293T等。有的細胞不易轉染，如4T1、NIH3T3、BMDC等。其次，與轉染試劑的用量及與DNA的比例有關(guān)，在最佳的轉染比例附近可以達到最佳的轉染效果。最后，沒(méi)有使用最適宜的細胞密度，應根據各種轉染試劑的說(shuō)明書(shū)中推薦的細胞密度進(jìn)行細胞接種，更有利于提高轉染效率。

二：轉染效果不穩定，不能重現

轉染效果不穩定一般與兩個(gè)因素緊密相關(guān)，一個(gè)是轉染試劑的穩定性，另一個(gè)是基因的穩定性。轉染試劑應按照說(shuō)明書(shū)建議的保存溫度及條件進(jìn)行保存。如使用脂質(zhì)體類(lèi)的轉染試劑，則不建議反復凍融，會(huì )引起該轉染試劑結構上的變化?；蛉缍虝r(shí)間內連續使用，可放置于4℃保存。若超過(guò)10天不使用，建議置于-20℃或-80℃長(cháng)期儲存以降低核酸的降解速度。

三：細胞毒性大

導致轉染時(shí)細胞毒性大的因素有很多，例如DNA的用量過(guò)大、轉染試劑的用量過(guò)大、轉染時(shí)細胞狀態(tài)較差以及培養基中抗生素的加入等。建議嚴格按照所選擇轉染試劑的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，以避免細胞毒性大的問(wèn)題。

四：沒(méi)有生成高效率的DNA轉染試劑復合物

沒(méi)有生成高效復合物的因素有很多。首先，可能是沒(méi)有選對合適的轉染試劑。挑選轉染試劑時(shí)應考慮基因的種類(lèi)及分子量等因素。其次，有的轉染試劑對血清的影響很大，應在無(wú)血清情況下進(jìn)行轉染。使用諾寧生物的EZ poly?  系列轉染試劑無(wú)需考慮血清對轉染體系的影響，可在含血清培養基中進(jìn)行轉染。

五：使用錯誤的轉染操作步驟

無(wú)論使用哪一款基因轉染試劑，都應嚴格按照該轉染試劑的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，其中包括轉染試劑的用量、基因用量、最佳轉染比例、孵育時(shí)間、檢測時(shí)間等重要因素。

六：轉染試劑有時(shí)呈云霧狀渾濁

如發(fā)現轉染試劑出現云霧狀渾濁應立即聯(lián)系客服人員?；蜣D染試劑一般都呈清澈透明狀態(tài)，呈云霧狀渾濁可能是由于轉染試劑發(fā)生了污染或儲存溫度太低，請務(wù)必按照試劑說(shuō)明書(shū)要求的溫度進(jìn)行儲存。如出現此現象，建議溫浴10分鐘后，觀(guān)察是否澄清。

七：轉染復合物出現沉淀

當轉染試劑和基因的用量都高于說(shuō)明書(shū)用量，或復合物的孵育體系體積小于說(shuō)明書(shū)建議時(shí)，由于體系中過(guò)量的電荷發(fā)生了聚集會(huì )導致體系中的復合物出現沉淀。建議要嚴格參考說(shuō)明書(shū)的用量進(jìn)行轉染。

八：siRNA轉染時(shí)，基因沉默效率不夠高

影響siRNA沉默效率的因素很多，如基因本身是否被環(huán)境中的RNA酶污染降解？或所使用的細胞是否為難轉染細胞？以及是否按照說(shuō)明書(shū)建議的用量進(jìn)行了操作等。首先應該選擇合適的siRNA基因轉染試劑，確保細胞密度在60-70%之間，并嚴格按照說(shuō)明書(shū)建議的用量去使用操作。

九：DNA-siRNA共轉染時(shí)，基因沉默效率不夠高

當細胞同時(shí)轉染DNA和siRNA時(shí)，建議使用分別轉染的方式進(jìn)行。即使用基因轉染試劑分別與DNA和siRNA進(jìn)行復合，再將兩個(gè)復合物體系分兩次分別加入到同一個(gè)裝有細胞的實(shí)驗孔中。因DNA和RNA的轉染機理不相同，如只想使用一種轉染試劑同時(shí)轉染兩種基因，建議一定要使用通用型基因轉染試劑，如EZ poly? 系列的DNA/RNA產(chǎn)品，即可以轉染DNA又可以轉染RNA。