Polyethylenimine Linear (PEI) MW25000線(xiàn)性PEI轉染試劑

Polyethylenimine Linear (PEI) MW25000 線(xiàn)性PEI轉染試劑

貨號：NBS2500-1ml，

NBS2500-10ml，

NBS2500-50ml，

品牌：NoninBio

產(chǎn)品描述

線(xiàn)性化聚乙烯亞胺PEI 25000，一種高電荷陽(yáng)離子聚合物，非常容易結合于高電荷陰離子基質(zhì)。工業(yè)應用上，線(xiàn)性化PEI可改善負電荷染料的物理外觀(guān)，以調整染料的化學(xué)特性和增強染料與固相基質(zhì)的黏附能力，常用作黏附增強劑，作用同多聚賴(lài)氨酸（poly-lysine）；科研應用上，線(xiàn)性化PEI能與DNA或其他負電荷生物大分子簡(jiǎn)單結合，正是這一特性，使得成為一種非常行之有效的載體運輸介質(zhì)（Vector carrier），即轉染試劑。

線(xiàn)性化聚乙烯亞胺PEI 25000（Polyethylenimine Linear, MW 25000）是一款優(yōu)秀、低成本、值得信賴(lài)的瞬時(shí)性轉染試劑。在HEK293和CHO表達系統中，PEI在寬廣的生產(chǎn)規模內（從96孔板到100L生物反應器）能提供連續性的高基因表達。

本品是PEI 25K的無(wú)菌溶液，濃度為1mg/ml，直接使用即可。按照DNA：PEI 25K=1：3的比例來(lái)操作，1ml本品足以用來(lái)轉染330μg DNA，或者，6孔板內約做80-160次轉染。

保存與運輸方法

保存：-20℃保存，1年有效。

運輸：冰袋運輸。

注意事項

1）收到本品或第一次使用，請根據單次用量分裝后置于-20℃凍存，盡量降低反復凍融次數。

2）本品為無(wú)菌溶液，請操作過(guò)程中執行無(wú)菌操作。

3）請務(wù)必使用高質(zhì)量的無(wú)內毒素質(zhì)粒。通過(guò)260 nm光吸收測定DNA濃度，260nm / 280nm比值確定DNA純度（比值應該在1.8～2.0的范圍之內）。如有可能，請通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。

4）使用適當保存和經(jīng)常傳代的健康細胞。確保培養基沒(méi)有被細菌、真菌或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞，請在轉染前至少傳代兩次。

5）對于某些類(lèi)型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞，在轉染前兩天鋪板可顯著(zhù)提高重組蛋白的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板，可適當降低鋪板密度，以確保轉染時(shí)細胞的匯合度仍為60-80%。

6）對于接觸抑制敏感的細胞，可適當降低鋪板密度。

7）推薦用商業(yè)化的無(wú)血清培養基比如Opti-MEM I來(lái)稀釋DNA和PEI 25K，制備轉染復合物。

8）轉染過(guò)程請不要使用抗生素。

9）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

一、操作方法（貼壁細胞）

1.1鋪板

a）轉染前18-24h進(jìn)行鋪板，調整合適的細胞密度（參考表1），使其在轉染時(shí)細胞密度達60-80%。

【注意】：高血清水平會(huì )抑制轉染效率，大多數情況，低血清水平（≤5%）能產(chǎn)生最高的轉染效率。

1.2轉染步驟（以6孔板的單孔為例）

a）轉染前1-2h，每孔替換為3ml含2%血清的新鮮生長(cháng)培養基。

b）制備PEI 25K-DNA轉染復合物（嚴格按照以下步驟進(jìn)行）：①往300μl無(wú)血清培養基（比如：Opti-MEM I）加入2μg質(zhì)粒DNA,低速混合/渦旋均勻；②往混合物內加入8μl PEI 25K（1mg/ml）（DNA/PEI 25K=1：4），低速渦旋5s；③無(wú)菌環(huán)境，室溫靜置30min以形成PEI 25K-DNA轉染復合物。④用移液槍上下吹打3次，輕輕混勻。

c）將PEI 25K-DNA轉染復合物轉到孔內。輕輕晃動(dòng)培養皿或輕微渦旋，使得復合物分散均勻。

【注意】：以上步驟可通過(guò)調整PEI 25K-DNA復合物在無(wú)血清培養基內的體積（為培養總體積的10%）來(lái)進(jìn)行放大或縮?。蓞⒖急?）。

1.3 孵育

a）37℃，5% CO2培養箱內培養細胞，轉染后12-18h，去除含PEI 25K-DNA復合物的培養液，更換新鮮的生長(cháng)培養基。

b）通常，轉染后36-48h能檢測到重組蛋白表達。一般在轉染后72-96h能觀(guān)察到最大水平的表達。

PEI 25K客戶(hù)使用案例（逐步增加中）

圖片描述：以人結腸癌細胞（HCT116）為對象，按照質(zhì)粒DNA：PEI 25000=1:4的比例制備轉染混合物并轉染進(jìn)入HCT116細胞，36h后于熒光顯微鏡下觀(guān)察轉染效率（GFP，綠色熒光蛋白）。

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