（NBS0213）EZ poly?S轉染試劑

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（NBS0213）EZ poly?S轉染試劑

EZ poly?S轉染試劑
貨號：NBS0213-0.5ml
NBS0213-1ml
品牌：NoninBio

價(jià)格：￥880.00~1650.00

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NBS0213-0.5ml NBS0213-1ml

EZ poly?S轉染試劑

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱(chēng)	包裝規格
NBS0213-0.5ml	EZ poly?S轉染試劑	0.5ml
NBS0213-1ml	EZ poly?S轉染試劑	1ml

NoninBio轉染試劑對標產(chǎn)品列表

品牌	NoninBio	Invitrogen	polyplus
DNA專(zhuān)用	EZ poly? DNA轉染試劑	Lipofectamine 2000 /1.5mL	jetOPTIMUS?/1.5mL
DNA和RNA通用	EZ poly? DNA/RNA 轉染試劑	Lipofectamine 3000 /1.5mL	jetPRIME?/1.5mL
RNA 專(zhuān)用	EZ poly? RNA 轉染試劑	Lipofectamine RNAiMAX /1.5mL	INTERFERin?/1mL
懸浮細胞專(zhuān)用	EZ poly? S轉染試劑		PEIpro?/1.5mL
mRNA 專(zhuān)用	EZ poly? mRNA 轉染試劑	Lipofectamine RNAiMAX /1.5mL	jetMESSENGER? /0.75mL
體內專(zhuān)用	EZ poly? in vivo 體內轉染試劑	Invivofectamine 3.0 /10 次	in vivo -jetRNA? /1mL

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

EZ poly?S轉染試劑是一款專(zhuān)用于懸浮細胞轉染的DNA轉染試劑，可用于質(zhì)粒DNA在懸浮生長(cháng)細胞中的傳送。它適用于大規模蛋白生產(chǎn)，及工業(yè)化生產(chǎn)中的真核細胞轉染。具有不受血清影響、毒性低、穩定性好、轉染簡(jiǎn)單易行、重復性好等優(yōu)點(diǎn)。

應用范圍:

EZ poly?S轉染試劑特別適用于293F和CHO-S等懸浮細胞的轉染。在有血清和無(wú)血清的條件下，均可得到較高的轉染效率，且重復性好。在大規模蛋白生產(chǎn)中，操作簡(jiǎn)單、蛋白表達量高、細胞毒性低、細胞通用性好。

保存條件:

2-8℃保存一年

運輸：

常溫運輸

質(zhì)粒DNA的轉染:

以100mL培養瓶為例，請參考表1的轉染規模調整，步驟如下:

1	細胞接種: 0.2~0.5×10⁶/mL個(gè)細胞，接種于20mL培養基中。在37℃，120rpm，5%CO²的條件下培養。
2	質(zhì)粒稀釋: 將10 μg質(zhì)粒稀釋于Opti-MEM培養基中，終體積50 μL。
3	轉染試劑稀釋: 取20μL的EZ poly?S轉染試劑加入到30μL的 Opti-MEM培養基中，稀釋后的終體積為50μL
4	復合物制備：將上述質(zhì)粒DNA稀釋液和轉染試劑稀釋液混合，輕輕吹打均勻后，室溫靜置10分鐘
5	將上述100μL復合物加入到細胞培養瓶中，繼續搖動(dòng)培養培養18~48小時(shí)后檢測轉染效率，無(wú)需更換培養基

質(zhì)粒DNA的轉染優(yōu)化:

可通過(guò)改變細胞密度、 DNA濃度以及EZ poly?S轉染試劑濃度對轉染進(jìn)行優(yōu)化。EZ poly?S 轉染試劑(μL): DNA (μg)可以在1:1和5:1之間調整。轉染大于48h后，可通過(guò)適量添加培養基的方式延長(cháng)轉染時(shí)間。

表1. 不同培養瓶所需轉染試劑和DNA的用量

培養瓶	細胞數量	接種培養基	Opti-MEM 稀釋后終體積	DNA轉染
培養瓶	細胞數量	接種培養基	Opti-MEM 稀釋后終體積	試劑用量	DNA
50mL	0.5×10⁶/mL	10mL	50μL	10μL	5μg
100mL	0.5×10⁶/mL	20mL	100μL	20μL	10μg
250mL	0.5×10⁶/mL	50mL	200μL	50μL	25μg
500mL	0.5×10⁶/mL	100mL	400μL	100μL	50μg
1L	0.5×10⁶/mL	200mL	2mL	200μL	100μg
5L	0.5×10⁶/mL	1L	4mL	1mL	500μg

一：轉染效率低

影響細胞轉染效率的因素有很多。首先，與所轉染細胞有關(guān)，有的細胞容易轉染，如HeLa、B16F10、293T等。有的細胞不易轉染，如4T1、NIH3T3、BMDC等。其次，與轉染試劑的用量及與DNA的比例有關(guān)，在最佳的轉染比例附近可以達到最佳的轉染效果。最后，沒(méi)有使用最適宜的細胞密度，應根據各種轉染試劑的說(shuō)明書(shū)中推薦的細胞密度進(jìn)行細胞接種，更有利于提高轉染效率。

二：轉染效果不穩定，不能重現

轉染效果不穩定一般與兩個(gè)因素緊密相關(guān)，一個(gè)是轉染試劑的穩定性，另一個(gè)是基因的穩定性。轉染試劑應按照說(shuō)明書(shū)建議的保存溫度及條件進(jìn)行保存。如使用脂質(zhì)體類(lèi)的轉染試劑，則不建議反復凍融，會(huì )引起該轉染試劑結構上的變化?；蛉缍虝r(shí)間內連續使用，可放置于4℃保存。若超過(guò)10天不使用，建議置于-20℃或-80℃長(cháng)期儲存以降低核酸的降解速度。

三：細胞毒性大

導致轉染時(shí)細胞毒性大的因素有很多，例如DNA的用量過(guò)大、轉染試劑的用量過(guò)大、轉染時(shí)細胞狀態(tài)較差以及培養基中抗生素的加入等。建議嚴格按照所選擇轉染試劑的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，以避免細胞毒性大的問(wèn)題。

四：沒(méi)有生成高效率的DNA轉染試劑復合物

沒(méi)有生成高效復合物的因素有很多。首先，可能是沒(méi)有選對合適的轉染試劑。挑選轉染試劑時(shí)應考慮基因的種類(lèi)及分子量等因素。其次，有的轉染試劑對血清的影響很大，應在無(wú)血清情況下進(jìn)行轉染。使用諾寧生物的EZ poly? 系列轉染試劑無(wú)需考慮血清對轉染體系的影響，可在含血清培養基中進(jìn)行轉染。

五：使用錯誤的轉染操作步驟

無(wú)論使用哪一款基因轉染試劑，都應嚴格按照該轉染試劑的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，其中包括轉染試劑的用量、基因用量、最佳轉染比例、孵育時(shí)間、檢測時(shí)間等重要因素。

六：轉染試劑有時(shí)呈云霧狀渾濁

如發(fā)現轉染試劑出現云霧狀渾濁應立即聯(lián)系客服人員?；蜣D染試劑一般都呈清澈透明狀態(tài)，呈云霧狀渾濁可能是由于轉染試劑發(fā)生了污染或儲存溫度太低，請務(wù)必按照試劑說(shuō)明書(shū)要求的溫度進(jìn)行儲存。如出現此現象，建議溫浴10分鐘后，觀(guān)察是否澄清。

七：轉染復合物出現沉淀

當轉染試劑和基因的用量都高于說(shuō)明書(shū)用量，或復合物的孵育體系體積小于說(shuō)明書(shū)建議時(shí)，由于體系中過(guò)量的電荷發(fā)生了聚集會(huì )導致體系中的復合物出現沉淀。建議要嚴格參考說(shuō)明書(shū)的用量進(jìn)行轉染。

八：siRNA轉染時(shí)，基因沉默效率不夠高

影響siRNA沉默效率的因素很多，如基因本身是否被環(huán)境中的RNA酶污染降解？或所使用的細胞是否為難轉染細胞？以及是否按照說(shuō)明書(shū)建議的用量進(jìn)行了操作等。首先應該選擇合適的siRNA基因轉染試劑，確保細胞密度在60-70%之間，并嚴格按照說(shuō)明書(shū)建議的用量去使用操作。

九：DNA-siRNA共轉染時(shí)，基因沉默效率不夠高

當細胞同時(shí)轉染DNA和siRNA時(shí)，建議使用分別轉染的方式進(jìn)行。即使用基因轉染試劑分別與DNA和siRNA進(jìn)行復合，再將兩個(gè)復合物體系分兩次分別加入到同一個(gè)裝有細胞的實(shí)驗孔中。因DNA和RNA的轉染機理不相同，如只想使用一種轉染試劑同時(shí)轉染兩種基因，建議一定要使用通用型基因轉染試劑，如EZ poly? 系列的DNA/RNA產(chǎn)品，即可以轉染DNA又可以轉染RNA。

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