產(chǎn)品外觀(guān)形態(tài)：固體（注：鬼筆環(huán)肽系列產(chǎn)品有固體和液體兩種，液體為DMSO溶解后的產(chǎn)品，則不需再溶解。）

鬼筆環(huán)肽Phalloidin標記探針會(huì )選擇性地結合F-肌動(dòng)蛋白。以納摩爾濃度使用，鬼筆環(huán)肽衍生物是方便的探針，用于標記，鑒定和定量甲醛固定和透化組織切片中的F-肌動(dòng)蛋白，細胞培養物或無(wú)細胞實(shí)驗。肌動(dòng)蛋白是一種球狀的，大約42kDa的蛋白質(zhì)，幾乎存在于所有真核細胞中。 它也是最高度保守的蛋白質(zhì)之一，與藻類(lèi)和人類(lèi)不同的物種相差不超過(guò)20％。 肌動(dòng)蛋白是細胞中兩種細絲的單體亞基：微絲，細胞骨架的三個(gè)主要組分之一，以及微絲，是肌細胞中收縮裝置的一部分。 因此，肌動(dòng)蛋白參與許多重要的細胞過(guò)程，包括肌肉收縮，細胞運動(dòng)，細胞分裂和胞質(zhì)分裂，囊泡和細胞器運動(dòng)，細胞信號傳導，以及細胞連接和細胞形狀的建立和維持。

鬼筆環(huán)肽比肌動(dòng)蛋白單體更緊密地結合肌動(dòng)蛋白絲，導致肌動(dòng)蛋白亞基從絲狀末端解離的速率常數降低，基本上通過(guò)防止絲解聚來(lái)穩定肌動(dòng)蛋白絲。此外，發(fā)現鬼筆環(huán)肽抑制F-肌動(dòng)蛋白的ATP水解活性。鬼筆環(huán)肽在細胞中以不同濃度起作用不同。當以低濃度引入細胞質(zhì)時(shí)，鬼筆環(huán)肽將較少聚合形式的細胞質(zhì)肌動(dòng)蛋白以及微絲蛋白聚集成聚集的肌動(dòng)蛋白聚合物的穩定“島”，但它不會(huì )干擾應力纖維，即厚的微絲束。鬼筆環(huán)肽的性質(zhì)是通過(guò)用熒光類(lèi)似物標記鬼筆環(huán)肽并用它們染色肌動(dòng)蛋白絲用于光學(xué)顯微鏡來(lái)研究F-肌動(dòng)蛋白在細胞中的分布的有用工具。鬼筆環(huán)肽的熒光衍生物已經(jīng)證明在定位活細胞或固定細胞中的肌動(dòng)蛋白絲以及在體外可視化單個(gè)肌動(dòng)蛋白絲方面非常有用。熒光鬼筆環(huán)肽衍生物已被用作高分辨率肌動(dòng)蛋白研究中的重要工具。 AAT Bioquest可以提供多色成像應用的鬼筆環(huán)肽。

樣品分析方案

概述

在微孔板孔中制備樣品

從板中的樣品中取出液體

添加鬼筆環(huán)肽溶液（100μL/孔）

在室溫下染色細胞20至90分鐘

清洗細胞在顯微鏡下檢查樣品

注意：將小瓶加熱至室溫并在打開(kāi)前短暫離心。

操作步驟

1.制備1000 X鬼筆環(huán)肽DMSO儲備液：將30μLDMSO加入裝有粉末的小瓶中。

2.制備1X鬼筆環(huán)肽綴合物工作溶液：加入1μL1000X鬼筆環(huán)肽綴合物DMSO溶液至1 mL含1％BSA的PBS。

注意1：鬼筆環(huán)肽綴合物的未使用的1000X DMSO儲備溶液應等分并儲存在-20℃，避光。

注意2：不同的細胞類(lèi)型可能染色不同。 應相應地制備鬼筆環(huán)肽綴合物工作溶液的濃度。

3.染色細胞：

3.1執行甲醛固定。 在室溫下將含3.0-4.0％甲醛的細胞在PBS中孵育10-30分鐘。

注意：避免使用任何含甲醇的固定劑，因為甲醇會(huì )在固定過(guò)程中破壞肌動(dòng)蛋白。 優(yōu)選的固定劑是不含甲醇的甲醛。

3.2用PBS沖洗固定的細胞2-3次。

3.3可選：在PBS中加入0.1％Triton X-100固定細胞3至5分鐘，以增加滲透性。 用PBS沖洗細胞2-3次。

3.4將100μL/孔（96孔板）鬼筆環(huán)肽綴合物工作溶液加入固定的細胞，并在室溫下染色細胞20至90分鐘。

3.5在加上蓋玻片之前，用PBS輕輕沖洗細胞2至3次以除去過(guò)量的鬼筆環(huán)肽綴合物，然后在顯微鏡下進(jìn)行，密封和成像。

參考文獻

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