鬼筆環(huán)肽Phalloidin CAS 17466-45-4

	貨號	NBS5301	存儲條件	在零下15度以下保存, 避免光照
	規格	1 mg	價(jià)格	2604
	Ex (nm)		Em (nm)
	分子量	788.88	溶劑	DMSO

簡(jiǎn)要概述

產(chǎn)品外觀(guān)形態(tài)：固體（注：鬼筆環(huán)肽系列產(chǎn)品有固體和液體兩種，液體為DMSO溶解后的產(chǎn)品，則不需再溶解。）

鬼筆環(huán)肽是一種雙環(huán)七肽毒素，特異性結合在F-肌動(dòng)蛋白亞基之間的界面上，將相鄰的亞基鎖定在一起。鬼筆環(huán)肽與肌動(dòng)蛋白絲的結合比與肌動(dòng)蛋白單體的結合要緊密得多，從而導致肌動(dòng)蛋白亞基從絲端解離的速率常數降低，因此通過(guò)防止絲解聚而基本穩定了肌動(dòng)蛋白絲，最終，發(fā)現鬼筆環(huán)肽抑制F-肌動(dòng)蛋白的ATP水解活性。因此，鬼筆環(huán)肽以不同于G-肌動(dòng)蛋白的構型捕獲肌動(dòng)蛋白單體，并通過(guò)大大降低單體解離的速率常數來(lái)穩定F-肌動(dòng)蛋白的結構。鬼筆環(huán)肽在細胞中不同濃度下的功能不同，當以低濃度引入細胞質(zhì)時(shí)，鬼筆環(huán)肽將聚合度較低的胞質(zhì)肌動(dòng)蛋白和纖維蛋白吸收到聚集的肌動(dòng)蛋白聚合物的穩定“島”中，但它不會(huì )干擾應力纖維，即厚的微絲束。鬼筆環(huán)肽的性質(zhì)是研究F-肌動(dòng)蛋白在細胞中分布的有用工具，方法是用熒光類(lèi)似物標記鬼筆環(huán)肽并將其用于染色肌動(dòng)蛋白絲以進(jìn)行光學(xué)顯微鏡檢查。鬼筆環(huán)肽的熒光衍生物已被證明在定位活細胞或固定細胞中的肌動(dòng)蛋白絲以及體外觀(guān)察單個(gè)肌動(dòng)蛋白絲方面非常有用。熒光鬼筆環(huán)肽衍生物已被用作高分辨率研究肌動(dòng)蛋白網(wǎng)絡(luò )的重要工具。

產(chǎn)品說(shuō)明

樣品分析方案

概述

在微孔板孔中制備樣品

從板中的樣品中取出液體

添加鬼筆環(huán)肽溶液（100μL/孔）

在室溫下染色細胞20至90分鐘

清洗細胞在顯微鏡下觀(guān)察樣品

注意：將小瓶加熱至室溫并在打開(kāi)前短暫離心。

操作步驟

1.制備1000 X鬼筆環(huán)肽DMSO儲備液：將30μLDMSO加入裝有粉末的小瓶中。

2.制備1X鬼筆環(huán)肽綴合物工作溶液：加入1μL1000X鬼筆環(huán)肽綴合物DMSO溶液至1 mL含1％BSA的PBS。

注意1：鬼筆環(huán)肽綴合物未使用的1000X DMSO儲備溶液應等分并儲存在-20℃，避光。

注意2：不同的細胞類(lèi)型可能染色不同。 應相應地制備鬼筆環(huán)肽綴合物工作溶液。

3.染色細胞：

3.1進(jìn)行甲醛固定，在室溫下將含3.0-4.0％甲醛的細胞在PBS中孵育10-30分鐘。

注意：避免使用任何含甲醇的固定劑，因為甲醇會(huì )在固定過(guò)程中破壞肌動(dòng)蛋白。 優(yōu)選的固定劑是不含甲醇的甲醛。

3.2用PBS沖洗固定的細胞2-3次。

3.3可選：在PBS中加入0.1％Triton X-100固定細胞3至5分鐘，以增加滲透性。 用PBS沖洗細胞2-3次。

3.4將100μL/孔（96孔板）鬼筆環(huán)肽綴合物工作溶液加入固定的細胞，并在室溫下染色細胞20至90分鐘。

3.5在加上蓋玻片之前，用PBS輕輕沖洗細胞2至3次以除去過(guò)量的鬼筆環(huán)肽綴合物，然后在顯微鏡下進(jìn)行，密封和成像。