Cell-tracker CM-DiI/活細胞示蹤劑/ DiI改良探針/紅色熒光

CM-DiI基本描述：

CM-DiI（活細胞的多代示蹤、固定細胞長(cháng)期示蹤）

CellTracker CM-DiI為DiI的衍生物，在DiI中加入了具有中度巰基反應特性的氯甲基取代物，后者能與細胞內含巰基的肽和蛋白結合，使得CM-DiI能夠抵抗醛類(lèi)的固定作用。CM-DiI在細胞固定、破膜及石蠟包埋的整個(gè)過(guò)程中均能很好的保留在細胞內，因此，與傳統細胞膜探針DiI相比較，更適于固定后標本的長(cháng)期示蹤。其紅色/綠色的光譜特征，使其可與綠色探針或者綠色熒光蛋白如GFP一起用于雙標實(shí)驗。

 CM-DiI基本特性：

1） CAS NO：180854-97-1

2） 化學(xué)名：3H-Indolium, 5-[[[4-(chloromethyl)benzoyl]amino]methyl]-2-[3-(1,3-dihydro-3,3-dimethyl-1- octadecyl-2H-indol-2-ylidene)-1-propenyl]-3,3-dimethyl

-1-octadecyl-, chloride

3） 分子式：C68H105Cl2N3O

4） 分子量：1051.5g/mol

5）  純度：≥95%

6）  外觀(guān)：紅色固體

7）  Ex/Em：553/570 nm（甲醇）

8）  推薦濾光器：Omega-XF32, Chroma-31002

9）  溶解性：溶于DMSO，乙醇，DMF

10）化學(xué)結構圖： 

CellTracker CM-DiI具以下特征：

a）使用方便，只需吸掉培養液，加入探針，30min孵育，顯微成像；

b）熒光信號至少可持續72h以上（一般3-6代），染料只傳到子代細胞，不會(huì )染上鄰近細胞。

c）毒性很低，不會(huì )影響細胞增殖和活力。

總而言之，CellTracker CM-DiI具有良好的示蹤特征，對細胞無(wú)毒，穩定長(cháng)效，染料很好保留在細胞內，生理pH熒光信號強。

研究證實(shí)，CM-DiI標記后熒光在胞內表達穩定，陽(yáng)性標記率達98%以上，標記細胞形態(tài)良好，能有效地觀(guān)察細胞在體外的誘導分化情況；或將標記的細胞注入體內，可以有效的顯示移植細胞在活體組織中的遷移及分化。

CM-DiI（改良探針）與DiI（傳統探針）在透化和非透化處理樣本的效果比較：【來(lái)自文獻Staffend NA, et al. DiOlistic labeling of neurons in tissue slices: a qualitative and quantitative analysis of methodological variations.Front Neuroanat. 2011 Mar 1;5:14.】

1、未透化組織DiI&CM-DiI標記完整性的比較

結果顯示【見(jiàn)圖1&圖2】：兩種熒光探針（DiI和CM-DiI）標記組織的全細胞檢測顯示，不管是即刻觀(guān)察，還是2周后觀(guān)察，染料完整性和圖片質(zhì)量都保持完整。對于樹(shù)突狀片段的結果染色結果一致。另外，通過(guò)分析樹(shù)突段的突棘密度來(lái)調查不同時(shí)間周期下染色穩定性和完整性。對于DiI標記的樹(shù)突段，不會(huì )時(shí)間段染色幾乎無(wú)差異。然而，CM-DiI標記的樹(shù)突段，突棘密度封片2周后明顯增強。

圖1（左）. 非透化熒光染色組織的全細胞檢測。A）DiI標記組織封片后馬上檢測；B）DiI標記組織封片2周后熒光檢測；C）CM-DiI標記組織封片后馬上檢測；D）CM-DiI標記組織封片2周后熒光檢測；

圖2（右）. 非透化熒光染色組織的樹(shù)突片段檢測。A）DiI標記組織封片后馬上檢測；B）DiI標記組織封片2周后熒光檢測；C）CM-DiI標記組織封片后馬上檢測；D）CM-DiI標記組織封片2周后熒光檢測；

2、透化組織DiI&CM-DiI標記完整性的比較

結果顯示【見(jiàn)圖3&圖4】：兩種熒光探針（DiI和CM-DiI）標記組織封片后即刻檢測，不論是全細胞還是樹(shù)突段，結果都無(wú)明顯差異；兩種熒光探針（DiI和CM-DiI）標記組織封片2周后檢測，不論是全細胞還是樹(shù)突段，CM-DiI標記的穩定性在熒光信號、光淬滅和最終圖片質(zhì)量上都強于DiI。

不管是即刻觀(guān)察，還是2周后觀(guān)察，染料完整性和圖片質(zhì)量都保持完整。對于樹(shù)突狀片段的結果染色結果一致。另外，通過(guò)分析樹(shù)突段的突棘密度來(lái)調查不同時(shí)間周期下染色穩定性和完整性。對于DiI標記的樹(shù)突段，不會(huì )時(shí)間段染色幾乎無(wú)差異。然而，CM-DiI標記的樹(shù)突段，突棘密度封片2周后明顯增強。

圖3（左）. 透化熒光染色組織的全細胞檢測。A）DiI標記組織封片后馬上檢測；B）DiI標記組織封片2周后熒光檢測；C）CM-DiI標記組織封片后馬上檢測；D）CM-DiI標記組織封片2周后熒光檢測；

圖4（右）. 透化熒光染色組織的樹(shù)突片段檢測。A）DiI標記組織封片后馬上檢測；B）DiI標記組織封片2周后熒光檢測；C）CM-DiI標記組織封片后馬上檢測；D）CM-DiI標記組織封片2周后熒光檢測；

溫馨提示：對于不經(jīng)透化處理的樣本，只需用傳統的細胞膜熒光探針如DiI染色即可。對于后續需透化處理的樣本，推薦用改良探針如CM-DiI（貨號：NBS5237-50ug）進(jìn)行染色。

細胞膜探針光譜和檢測濾片：

應用文獻：

1.  Hemmrich Ket al,Applicability of the dyes CFSE, CM-DiI and PKH26 for tracking of human preadipocytes to evaluate adipose tissue engineering.Cells Tissues Organs. 2006; 184(3-4):117-27.

2.  Andrade W, et al, The use of the lipophilic fluorochrome CM-DiI for tracking the migration of lymphocytes.J Immunol Methods. 1996 Aug 14;194(2):181-9.

3.  Schatteman GC, et al,Blood-derived angioblasts accelerate blood-flow restoration in diabetic mice.J Clin Invest. 2000 Aug; 106(4):571-8.

4.  Foley-Comer AJ, et al, Evidence for incorporation of free-floating mesothelial cells as a mechanism of serosal healing.J Cell Sci. 2002 Apr 1;115(Pt 7):1383-9.

5.  Djouad F, et al,Immunosuppressive effect of mesenchymal stem cells favors tumor growth in allogeneic animals.Blood. 2003 Nov 15;102(10):3837-44. Epub 2003 Jul 24.

6.  Hosie KA, et al,Chronic excitotoxin-induced axon degeneration in a compartmented neuronal culture model.ASN Neuro. 2012 Feb 23;4(1). pii: e00076. doi: 10.1042/AN20110031.

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