RIPA Lysis Buffer（strong）

RIPA 裂解液（強）

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

RIPA裂解液是一種經(jīng)典的細胞組織快速裂解液，對動(dòng)物細胞膜、胞漿、胞核成分均有較強的裂解作用，裂解得到的蛋白樣品可以用于常規的 Western、IP 等。RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多種，根據其裂解液的強度大致可以分為強、中、弱三類(lèi)。

RIPA裂解液（強）的主要成分為50mM Tris-Hcl（pH7.4），150mM NaCl，1% Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS，以及 sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多種抑制劑，可以有效抑制蛋白降解。

用RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。 由于含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。

使用說(shuō)明：

對于培養細胞樣品：

1、融解RIPA 裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使 PMSF的最終濃度為1 mM。

2、對于貼壁細胞：去除培養液，用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養液洗一遍(如果血清中 的蛋白沒(méi)有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。 用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1-2秒后，細胞就會(huì )被裂解。

對于懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒(méi)有 明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成50-100萬(wàn)細胞/管，然后再裂解。

3、充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續的PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。

裂解液用量說(shuō)明：通常6孔板每孔細胞加入150微升裂解液已經(jīng)足夠，但如果細胞密度 非常高可以適當加大裂解液的用量到200微升或250微升。

對于組織樣品：

1、把組織剪切成細小的碎片。

2、融解RIPA裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使 PMSF的最終濃度為1mM。

3、按照每20毫克組織加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分 可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。)

4、用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

5、充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續的PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。

6、如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過(guò)強烈vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續實(shí)驗。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

注：RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì )出現一小團透明膠狀物，屬正?，F象。該透明膠 狀物為含有基因組DNA等的復合物。在不檢測和基因組DNA結合特別緊密的蛋白的情況 下，可以直接離心取上清用于后續實(shí)驗；如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可 以通過(guò)超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續實(shí)驗。如果檢測一些常見(jiàn) 的轉錄因子，例如NF-kappaB、p53等時(shí)，通常不必進(jìn)行超聲處理，就可以檢測到這些轉錄因子。

注意事項：

1、為取得最佳的使用效果，盡量避免過(guò)多的反復凍融?？梢赃m當分裝后使用。

2、需自備PMSF。

3、裂解樣品的所有步驟都需在冰上或 4℃進(jìn)行。

4、可能需要通過(guò)一些預實(shí)驗來(lái)摸索最佳的適合您實(shí)驗條件的裂解液。

5、為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

保存條件：

-20℃保存，一年有效。