0.5M TCEP 溶液(pH6.8, Adjusted with NaOH)

0.5M TCEP 溶液(pH6.8, Adjusted with NaOH)

貨號：NBS0461

規格：10ml

品牌：NoninBio

TCEP-HCl的化學(xué)結構式

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

TCEP即TCEP-HCl，全稱(chēng)Tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride，中文名為三(2-羧乙基)膦鹽酸鹽。分子式為C₉H₁₅O₆P·HCl，分子量為286.65，CAS號51805-45-9。本產(chǎn)品為0.5M TCEP溶液，用NaOH調節pH值至6.8，常作為DTT的替代物用于蛋白上樣緩沖液和其它還原試劑的配制。在SDS-PAGE電泳中，一般終濃度在25mM左右的TCEP即可足夠還原蛋白樣品。TCEP使用范圍廣泛，無(wú)論是普通的SDS-PAGE中蛋白的還原，還是一些特殊的實(shí)驗如固相金屬離子親和層析(IMAC)、質(zhì)譜、Ni柱純化等其它需要還原二硫鍵的實(shí)驗，也特別適用于組氨酸標記蛋白純化、馬來(lái)酰亞胺偶聯(lián)半胱氨酸殘基反應，它能夠預防半胱氨酸殘基形成二硫鍵，但不像DTT或β-巰基乙醇本身易與馬來(lái)酰亞胺反應。

保存條件：

-20℃或4℃保存，至少1年有效。

注意事項：

1.      本產(chǎn)品用于蛋白變性時(shí)，建議95℃水浴或PCR儀加熱5分鐘，溫度過(guò)高(如100℃)或時(shí)間過(guò)長(cháng)(如超過(guò)15分鐘)，有可能會(huì )導致蛋白降解或上樣緩沖液中指示劑的顏色異常。

2.      本產(chǎn)品在磷酸鹽緩沖液中，尤其在中性或堿性磷酸鹽緩沖液中很不穩定。因此若實(shí)驗過(guò)程需將本產(chǎn)品配制在PBS緩沖液中使用，必須現配現用。

3.      大多數蛋白無(wú)需變性劑即可高效還原，但加入鹽酸胍等變性劑有助于將內部二硫鍵暴露而易于和TCEP發(fā)生反應。

4.      不建議使用尿素作為變性劑，避免形成氰酸酯并與巰基反應。

5.      盡量防止金屬接觸TCEP溶液，否則會(huì )一定程度降低TCEP活性。在還原過(guò)程中向樣品緩沖液中加入5至20mM EDTA有助于防止巰基被二價(jià)金屬離子氧化，如Zn²⁺、Cu²⁺和Mg²⁺等。

6.      還原后樣品應盡快使用，長(cháng)時(shí)間放置后會(huì )重新生成二硫化物。

7.      本產(chǎn)品在溶液中帶電荷，因此不適用于等電聚焦(IEF)實(shí)驗。

8.      TCEP對人體有害，操作時(shí)請小心，并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。

9.      為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

產(chǎn)品使用：

1.      在不含DTT或β-ME的2×SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(100mM Tris，20%甘油，4% SDS，0.005%溴酚藍，pH6.8)中加入本產(chǎn)品， 至TCEP終濃度為50mM，吹打或斡旋混勻。

2.      將等體積的上述2×SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液與蛋白提取液加入到新的離心管中并混勻，沸水浴中煮5min。

3.      樣品冷卻后，在離心機中瞬離，然后取上層溶液進(jìn)行Western blot實(shí)驗。