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(NBS1157)CCK-8細胞增殖及毒性檢測試劑

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(NBS1157)CCK-8細胞增殖及毒性檢測試劑

CCK-8細胞增殖及毒性檢測試劑
貨號:NBS1157-5ml, NBS1157-10ml, NBS1157-50ml, NBS1157-100ml;
規格:5ml(500T);10ml(2x500T);
50ml(10x500T);100ml(20x500T)
品牌:NoninBio
價(jià)格: 398.00~5680.00
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5ml(500T) 10ml(2x500T) 50ml(10x500T) 100ml(20x500T)

CCK-8細胞增殖及毒性檢測試劑

貨號:NBS1157

規格:5ml(500T);10ml(2x500T);

50ml(10x500T);100ml(20x500T)

品牌:NoninBio

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 細胞活性檢測試劑盒是一種廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性相關(guān)實(shí)驗的快速、高靈敏度檢測試劑盒。CCK-8 的主要成分為水溶性四唑鹽[Water Soluble Tetrazolium-8] (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽),Water Soluble Tetrazolium-8 是一種類(lèi)似于 MTT 的化合物,在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線(xiàn)粒體內的一些脫氫酶還原生成橙黃色的水溶性的甲臜(Formazan,參考圖 1)。Water Soluble Tetrazolium-8 被細胞內脫氫酶生物還原后生成的甲臜能夠直接溶解在培養基中?;罴毎臄的吭蕉?,則顏色越深。對于同樣的細胞,顏色的深淺和細胞數目呈線(xiàn)性關(guān)系。

     

  

   圖 1. Water Soluble Tetrazolium-8 分子結構及 CCK-8 檢測原理
產(chǎn)品特點(diǎn)
本試劑盒提供了一種靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、使用安全的細胞增殖與活性檢測方法。與傳統的 MTT 法相比具有明顯的優(yōu)勢:
(1)MTT法生成的甲臜不是水溶性的,需要使用 DMSO 等有機溶劑溶解;而 CCK-8 產(chǎn)生的甲臜是水溶性的,省去了溶解步驟,因此減少了該操作步驟帶來(lái)的實(shí)驗誤差。(2)由于CCK-8產(chǎn)生的甲臜是水溶性的,無(wú)需吸掉培養基后,再用 DMSO 等有機溶劑溶解,非常適合用于懸浮細胞的活性測定。
(3)與MTT方法相比,CCK-8 法線(xiàn)性范圍更寬,靈敏度更高。
(4)CCK-8法對細胞無(wú)毒性,可以多次測定,選取最佳測定時(shí)間。
(5)CCK-8法無(wú)需配制,即開(kāi)即用。
(6)CCK-8法適合大規模、高通量的樣品檢測。
儲存條件

本試劑盒在在-20℃至少可以保存 3 年,4℃保存1年,避免反復凍融。
本產(chǎn)品經(jīng)測試:5 次左右的反復凍融,對產(chǎn)品質(zhì)量幾乎沒(méi)有任何影響。

使用方法
(1)在 96孔板中配制100 μL 的細胞懸液。將培養板在培養箱預培養 24 小時(shí)(在 37℃,5% CO2 的條件下)。
(2)向培養板加入10μL 的待測藥物進(jìn)行處理。
(3)根據實(shí)驗需要,將培養板在培養箱孵育一段時(shí)間(例如:6, 12,24 或 48 小時(shí))。
【注】:如果不進(jìn)行藥物處理而直接測定細胞的活性,則不需要 2-3 步驟,直接從第 4 步操作。
(4)向每孔加入10μL CCK-8 溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會(huì )影響 OD 值的讀數)。
(5)將培養板在培養箱內孵育 2-4 小時(shí)。用酶標儀測定在450 nm 處的吸光度。如果暫時(shí)不測定 OD 值,可以向每孔中加入 10 μL 1% SDS(w/v)溶液或者 0.1 M HCl 溶液,并蓋上培養板蓋子,在室溫條件下避光保存。24 小時(shí)內吸光度不會(huì )發(fā)生變化。

    

圖2: CCK8  檢驗報告

 

注意事項
1)由于96孔板周?chē)蝗ψ钊菀渍舭l(fā),周?chē)蝗ㄗh不用,改加PBS或水。
2)CCK-8檢測細胞活性的原理是通過(guò)檢測活細胞脫氫酶催化的反應。如果待測體系中存在還原劑(例如一些抗氧化劑),可能會(huì )干擾檢測結果,需設法去除其影響。
3)當使用標準96孔板時(shí),貼壁細胞的最小接種量至少為 1,000 個(gè)/孔 (100 μL 培養基)。檢測白細胞時(shí)的靈敏度相對較低,因此推薦接種量不低于 2,500 個(gè)/孔 (100 μL 培養基),且加入CCK-8 后孵育的時(shí)間長(cháng)一些。
4)如果細胞培養時(shí)間較長(cháng),培養基顏色發(fā)生變化,應洗滌細胞更換培養基后再加CCK-8檢測。
5)酚紅和血清對本試劑盒的測定無(wú)明顯影響。培養基中酚紅的吸光度可以在計算時(shí),通過(guò)扣除只含有培養基的對照孔中本底的吸光度而消除,因此不會(huì )對檢測結果造成影響。