鬼筆環(huán)肽-iFluor 680標記

	貨號	23128	存儲條件	在零下15度以下保存, 避免光照
	規格	300 Tests	價(jià)格	3924
	Ex (nm)	684	Em (nm)	701
	分子量	~2000	溶劑	DMSO
	產(chǎn)品詳細介紹

簡(jiǎn)要概述

產(chǎn)品外觀(guān)形態(tài)：固體（注：鬼筆環(huán)肽系列產(chǎn)品有固體和液體兩種，液體為DMSO溶解后的產(chǎn)品，則不需再溶解。）

這種近紅外的熒光鬼筆環(huán)肽綴合物能與F-肌動(dòng)蛋白選擇性結合，其光穩定性比熒光素-鬼筆環(huán)肽綴合物要高得多。鬼筆環(huán)肽衍生物經(jīng)常以納摩爾濃度使用，常在甲醛固定和透化的組織切片、細胞培養或無(wú)細胞實(shí)驗中用于標記、鑒定和定量F-肌動(dòng)蛋白的便捷探針。鬼筆環(huán)肽與肌動(dòng)蛋白絲的結合比與肌動(dòng)蛋白單體的結合要緊密得多，從而導致肌動(dòng)蛋白亞基從絲端解離的速率常數降低，從而通過(guò)防止絲解聚而基本穩定了肌動(dòng)蛋白絲。而且，發(fā)現鬼筆環(huán)肽抑制F-肌動(dòng)蛋白的ATP水解活性。鬼筆環(huán)肽在細胞中不同濃度下的功能不同。當以低濃度引入細胞質(zhì)時(shí)，鬼筆環(huán)肽將聚合度較低的胞質(zhì)肌動(dòng)蛋白和纖維蛋白吸收到聚集的肌動(dòng)蛋白聚合物的穩定“島”中，但它不會(huì )干擾應力纖維，即厚的微絲束。鬼筆環(huán)肽的性質(zhì)是研究F-肌動(dòng)蛋白在細胞中分布的有效工具，方法是用熒光類(lèi)似物標記鬼筆環(huán)肽并將其用于染色肌動(dòng)蛋白絲以進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀(guān)察。鬼筆環(huán)肽的熒光衍生物已被證明在定位活細胞或固定細胞中的肌動(dòng)蛋白絲以及體外觀(guān)察單個(gè)肌動(dòng)蛋白絲方面非常有用。熒光鬼筆環(huán)肽衍生物已被用作高分辨率研究肌動(dòng)蛋白網(wǎng)絡(luò )的重要工具。鬼筆環(huán)肽-iFluor 680標記探針是AAT Bioquest為多色成像應用提供的一種熒光鬼筆環(huán)肽衍生物。

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產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

樣品分析方案

概述

在微孔板孔中制備樣品

從樣品中取出液體

添加鬼筆環(huán)肽-iFluor 680標記溶液（100μL/孔）

在室溫下染色細胞20至90分鐘

清洗細胞在顯微鏡下觀(guān)察樣品

注意：將小瓶加熱至室溫并在打開(kāi)前短暫離心。

操作步驟

1.將30μLDMSO加入粉末小瓶中。

2.將 1 μL 的鬼筆環(huán)肽-iFluor 680綴合溶液添加到 1 mL含1% BSA 的 PBS 中。

注意1：鬼筆環(huán)肽結合物未使用的儲備溶液應等分并儲存在-20℃，避光。

注意2：不同的細胞類(lèi)型可能染色不同。鬼筆環(huán)肽結合物工作溶液的濃度的制備需要根據實(shí)際而定。

3.染色細胞：

3.1執行甲醛固定，在室溫下將含3.0-4.0％甲醛的細胞在PBS中孵育10-30分鐘。

注意：避免使用任何含甲醇的固定劑，因為甲醇會(huì )在固定過(guò)程中破壞肌動(dòng)蛋白。 優(yōu)選的固定劑是不含甲醇的甲醛。

3.2用PBS沖洗固定細胞2-3次。

3.3可選：在PBS中加入0.1％Triton X-100固定細胞3至5分鐘，以增加滲透性。 用PBS沖洗細胞2-3次。

3.4將100μL/孔（96孔板）鬼筆環(huán)肽綴合物工作溶液加入固定的細胞中，并在室溫下染色細胞20至90分鐘。

3.5在加上蓋玻片之前，用PBS輕輕沖洗細胞2至3次以除去過(guò)量的鬼筆環(huán)肽結合物，然后在顯微鏡下進(jìn)行，密封和成像。

參考文獻

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