Mag-Fluo-4 AM, Cell Permeant 鎂離子熒光探針

【務(wù)必注意】：初次使用離子探針的用戶(hù)，強烈建議配合：Pluronic F-127, Cell Culture Tested 細胞培養級（貨號：NBS2009-1g）一起使用，以提高探針的水溶性和胞內加載性。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

具細胞膜滲透性的Mag-Fluo-4 AM是Fluo-4 AM（貨號：NBS7638-50ug）的一種結構類(lèi)似物，對鎂離子（Mg²⁺）和鈣離子（Ca²⁺）的Kd值分別是4.7mM和22μM，是一種非常有用的細胞內鎂離子指示劑和低親和性鈣離子指示劑。

產(chǎn)品特性：

1） 同義名：Mag-Fluo-4acetoxymethyl ester,cell permeant

2） 分子式：C37H33F2NO18

3） 分子量：817.65g/mol

4） 外觀(guān)：橙色固體

5） 純度：≥90%

6） Ex/Em：494/516 nm

7） 溶解性：溶于DMSO

8）化學(xué)結構圖：

保存條件: 

-20oC干燥避光保存，至少一年有效。

產(chǎn)品使用：

1.儲存液制備

取一管低溫保存的Mag-Fluo-4 AM，置于室溫回溫至少20min。之后加入高質(zhì)量無(wú)水DMSO配制成1~5mM儲存液，比如50μg Mag-Fluo-4 AM（MW：817.65 g/mol）溶于12μl DMSO，充分溶解后，即得到5mM儲存液?！咀⒁狻课词褂玫膬Υ嬉悍盅b儲存在-20℃，避免反復凍融，且要避光保存。盡快使用完。

 2.操作步驟

【注意】以下使用方法僅作參考，需根據具體的細胞類(lèi)型和實(shí)驗要求做出調整。加載溫度范圍是RT~37℃，更高溫度會(huì )提高加載速度，但更低溫度能最小化染料的內在化現象。表面活性劑Pluronic?F-127有時(shí)加入能促進(jìn)AM探針在水溶性緩沖液內的均勻分散。

2.1 在所需溫度（25℃~37℃）預孵育細胞10min，使其離子梯度達到穩定和平衡。

2.2 取4μl Mag-Fluo-4 AM儲存液和5μl 20% Pluronic?F-127，加入1ml細胞培養液，劇烈漩渦混勻得到均勻的探針?lè )稚⒁骸?/span>

2.3 取250μl上述制備的探針?lè )稚⒁杭尤?span>750μl含細胞的培養基內，混勻，此時(shí)得到終濃度為1~5μM的工作液，根據起始母液濃度來(lái)確定。

2.4 根據需求探針?lè )跤?span>15~60min。

2.5 細胞清洗3次，之后繼續孵育30min以保證細胞內的探針完全去酯化。之后選擇合適的儀器，進(jìn)行熒光測定。

應用示例（來(lái)自文獻，僅用作參考）

文獻一、 

使用方法（細胞內鎂離子水平的流式檢測）：1）用生理培養液（120 mM NaCl, 20 mM HEPES, 4.7 mM KCl, 1.2 mM KH2PO4, 1.2 mM MgSO4, 1.25 mM CaCl2, and 10 mM glucose）于37℃預孵育BMMSCs細胞10min使其達到離子梯度的穩定和平衡；2）用DMSO配制Mag-Fluo-4-AM儲存液1mM；3）取4ul Mag-Fluo-4-AM儲存液（1mM）和5ul 20% F-127，加入1ml培養基內，充分混勻；4）取0.25ml 分散液加入0.75ml含細胞培養液，使得探針終濃度為1uM；繼續孵育30min，之后清洗細胞3次，之后再孵育30min保證細胞內AM基團的完全去酯化；5）之后用流式細胞儀分析熒光強度（Ex/em:480/520nm）。

Fig 1. MagT1 knockdown reduced intracellular Mg2+ level in BMMSCs. Intracellular Mg2+ level was significantly reduced in MagT1 knockdown BMMSCs measured by indicator Mag-Fluo-4-AM using flow cytometry.

文獻二、 

使用方法（肌漿鈣離子的mag-fluo-4光度測定）：趾短屈?。?/span>FDB）肌肉纖維用Mag-Fluo-4-AM（4 μM）室溫加載20min，之后用加含25 μM BTS的無(wú)探針溶液清洗20min。之后對纖維進(jìn)行電刺激，用一系列抽搐刺激（1 ms pulse at 2 Hz）或5個(gè)連續性的強直電刺激。mag-fluo-4用480±15nm激發(fā)和535±30nm發(fā)射檢測。

Fig 2. Measurement of mitochondrial Ca2+ uptake during twitch stimulation in mt-pericam expressing CTRL and Mfn2 KD FDB fibers. A. Average (±SE) traces of mt-pericam fluorescence (402 nm excitation/515 nm emission) in CTRL (black circles) and Mfn2 KD (white circles) fibers during twitch stimulation. B. Average (±SE) relative change in mt-pericam fluorescence (ΔF/F) in CTRL and Mfn2 KD FDB fibers during twitch stimulation. C. Representative mag-fluo-4 traces during twitch stimulation of CTRL (black trace) or Mfn2 KD (grey trace) FDB fibers. D. Average (±SE) relative change in myoplasmic mag-fluo-4 fluorescence during twitch stimulation of CTRL or Mfn2 KD FDB fibers.

注意事項：

1.      熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2.      為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

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