腫瘤動(dòng)物模型的建立

將對數生長(cháng)的腫瘤細胞收集, 用無(wú)血清基質(zhì) 10.0ml, 于 1500 轉/分, 離心3min, 連續洗 3 次, 最后用無(wú)血清基質(zhì)混勻, 用血球計數器計算腫瘤細胞數量(平均 5 個(gè)中方格的細胞計數×1000444即是腫瘤數/毫升)。 計算完腫瘤細胞總數, 再將腫瘤細胞密度調至 4×106 個(gè)/ml, 每只小鼠腋下接種 50ul(即 2×105 個(gè)腫瘤細胞), 2周左右可捫及腫瘤小節結。一般選取 6—8 周的小鼠，不同的腫瘤細胞接種的數量和動(dòng)物不一樣, 比如 LL/2, B16, Hep? 可接種 C57 和 BALB/C 小鼠, NS-1, EL-4, C26, Meth A 可接種 BALB/C 小鼠, H22 接種昆明鼠。從腫瘤接種后可捫及小結節開(kāi)始, 每 3 天用游標卡尺量腫瘤縱橫大小(單位: mm), 至少連續一個(gè)月時(shí)間。注意要設計不同的實(shí)驗組和對照組, 每組動(dòng)物數一般為 5—10 只, 一般接種腫瘤6—8 周后，小鼠的腫瘤可生長(cháng)至直徑為 15—20mm (即小鼠會(huì )瀕臨死亡)時(shí), 可眼球取血，分離血清并保存血清, 處死小鼠, 取腫瘤組織照相, 取部分腫瘤組織作冰凍組織切片(或-80℃ 保存), 作相應的免疫組織化學(xué)染色 , 取部分腫瘤組織用3%中性的甲醛固定, 石臘包埋, 作常規 HE 染色.

小鼠尾靜脈注射方法

在靠近實(shí)驗臺邊緣處, 用大培養皿扣住小鼠, 左手抓住小鼠尾巴, 用酒精棉球擦尾巴, 可見(jiàn)到兩側靜脈; 注射前應確認針管內無(wú)氣泡, 注射時(shí)由尾尖開(kāi)始,順向刺入。失敗后再逐漸移向根部重刺, 若準確刺入靜脈內, 推進(jìn)時(shí)無(wú)阻力, 一般可注入 0.1—0.5ml。

腫瘤蛋白疫苗預防性動(dòng)物實(shí)驗

一般腫瘤蛋白疫苗首次免疫劑量 10ug/只小鼠, 與相應佐劑混勻, 在背部皮下注射, 第 2 次免疫間隔 2 周, 同樣加佐劑在皮下注射；第 3 次免疫間隔 2 周, 同樣加佐劑在皮下注射；第3 次免疫后 2 周, 用 ELISA 檢測其血清效價(jià)，當效價(jià)達到要求時(shí)；在接種腫瘤細胞前 3 天,于腹腔或尾靜脈加強注射 20ug /只。