wistDx 的重組酶聚合酶擴增（RPA）將徹底改變在資源有限的現場(chǎng)環(huán)境中擴增和檢測核酸的能力。

RPA 技術(shù)原理

RPA 體系的重點(diǎn)是重組酶，這些酶與寡核苷酸引物形成復合體，并使引物與雙鏈 DNA 中的同源序列配對。單鏈 DNA 結合（SSB）蛋白與被取代的 DNA 鏈結合，并使形成的 D 環(huán)保持穩定。然后從引物啟動(dòng)由聚合酶介導的 DNA 擴增，但前提是存在靶標序列。一旦啟動(dòng)，擴增反應將快速進(jìn)行，因此開(kāi)始時(shí)只需一點(diǎn)靶標 DNA 拷貝數，高特異性 DNA 擴增在數分鐘內即可達到可檢出水平。

RPA 循環(huán)
 

RPA 的技術(shù)特點(diǎn)

為什么選擇 RPA 方法?

◇ 速度

RPA 非?？焖?，在 37～42 °C 這一通常最適宜的反應溫度下，只需少量核酸分子即可在 3～10 分鐘（通常）內擴增至可檢出水平，但這將取決于靶標大小。在大部分情況下，只需要一個(gè)人即可在半小時(shí)內采集樣本、制備樣本、運行檢測并取得結果，并且無(wú)需專(zhuān)業(yè)培訓。

◇ 靈敏度

RPA 可檢測復合樣本中的單拷貝 DNA 和 10 拷貝甚至更少 RNA，而無(wú)需預先純化核酸。

◇ 特異性

RPA 具有高度特異性，該技術(shù)可從可能含有數百納克來(lái)自多個(gè)不同物種的不相關(guān)復合基因組 DNA（包括人 DNA）的樣本中識別并擴增單個(gè) DNA 分子，抗干擾能力強。

◇ 恒溫運行

RPA 在恒定的低溫（37～42 °C 最適宜）下運行。對于某些應用，如果需要，即便體溫也可支持 RPA 擴增。該反應在偏離溫度及低溫設置下也表現穩健，即使在常規室溫 25 °C 下也將奏效，雖然反應速度會(huì )下降; 在此溫度下，只要此生物化學(xué)過(guò)程被正確配置，仍可在一小時(shí)內獲得結果。

◇ 樣本容差

RPA 對樣本類(lèi)型的要求寬松，有時(shí)可直接檢測未經(jīng)核酸純化的原始樣本，例如血液、鼻拭子或培養基。通常，只需采用基本的病原體裂解方法處理樣本以釋放核酸即可，例如熱處理或弱堿處理。每種檢測所需的最合適的樣本制備方法取決于病原體滴定度、是否存在抑制劑以及裂解要求等因素，并將需要設計到檢測程序中。RPA 對某些復合樣本類(lèi)型的寬容性使該技術(shù)非常適合廣泛的現場(chǎng)實(shí)地應用。

◇ 廣泛的適用性

RPA 能夠方便地應用于任何 DNA 或 RNA 靶標，無(wú)序列偏好性，這一點(diǎn)對于 NGS 尤其重要。如果將逆轉錄酶添加到反應混合液中開(kāi)發(fā)出了超高靈敏度的 RNA 一步檢測法。

◇ 多重檢測

通過(guò)將多種引物同時(shí)添加到同一反應管中，單次 RPA 測試即可擴增和檢測多種不同的靶標。

◇ 低設備成本

RPA 僅需要基本的檢測設備，也就是說(shuō)，最終用戶(hù)可以使用 RPA 技術(shù)開(kāi)發(fā)出適合各種應用和環(huán)境的人性化診斷方法和試劑盒。

◇ 靈活的試劑形態(tài)

核心反應組分能夠以穩定的干燥形態(tài)供貨，該形態(tài)易于運輸，且無(wú)需冷藏即可儲存最多 12 個(gè)月（穩定性可能因用途不同而有變化，因此仍建議在冷藏條件下長(cháng)期儲存），也能夠以 PCR 試劑更常見(jiàn)的液體形態(tài)供貨，該形態(tài)允許用戶(hù)針對特定的應用改變反應體積和組分比例。

◇ 多種檢測形式

RPA 可應用于各種檢測系統和儀器，包括實(shí)時(shí)熒光探針和夾心法等形式。

RPA 與 其他核酸擴增方法 PCR 及 LAMP 的比較

產(chǎn)品系列
 

TwistAmp^? 試劑盒（隨附凍干試劑）的試劑形態(tài)具有高度便利性，非常適合在現場(chǎng)、床邊等環(huán)境中使用，而且特別適用于無(wú)法維持冷鏈的情況下。TwistAmp^? 研究試劑盒包含使用最終用戶(hù)設計的特定引物進(jìn)行核酸擴增時(shí)所需的所有試劑。

包含凍干試劑的 TwistAmp^? 試劑盒具有以下優(yōu)勢：

* RPA 擴增溫度要求低，允許使用低成本、便于攜帶的檢驗設備。

* 干 RPA 試劑足夠穩定，可以在室溫下運輸。

* 允許多種「適宜現場(chǎng)的」檢測輸出技術(shù)，例如側向層析技術(shù)和熒光技術(shù)。

* RPA 對一些復雜樣本類(lèi)型表現出高度穩健性（即樣本耐受性），更適合于許多不同的現場(chǎng)實(shí)地應用。

除了在現場(chǎng)實(shí)地使用中的優(yōu)勢，通過(guò) TwistAmp^? 試劑盒還便于為許多應用和用途開(kāi)發(fā)出快速、特異且靈敏的 DNA 和 RNA 檢測方法。

TwistAmp^? Basic 試劑盒可實(shí)現 DNA 擴增。包含 DNA 擴增所需的所有酶和試劑，用戶(hù)只需提供引物和模板。使用 TwistAmp^? Basic 時(shí)，即使 PCR 引物也有效。TwistAmp^? Basic 已被用于固相、加尾引物、配基、電化學(xué)和微陣列等應用。

非常適用于：終點(diǎn)凝膠電泳 DNA 檢測、下游應用（例如亞克?。?br/> 

TwistAmp^? exo 試劑盒可實(shí)現實(shí)時(shí)熒光 DNA 擴增。若想要以均相形式將 TwistDx RPA 擴增技術(shù)與 TwistDx 專(zhuān)利熒光 TwistAmp^? exo 探針結合使用，則推薦使用本產(chǎn)品。用戶(hù)只需提供引物、探針和模板。更多信息請參閱手冊。

非常適用于：實(shí)時(shí)熒光 DNA 檢測
 

TwistAmp^? nfo 試劑盒可實(shí)現橫向流動(dòng)檢測用 DNA 擴增。若想要通過(guò)終點(diǎn)夾心法（例如橫向流動(dòng) [LF] 試紙條）檢測有效 DNA 擴增反應的產(chǎn)物，則適合使用本產(chǎn)品。用戶(hù)只需提供引物、探針和模板。

非常適用于：開(kāi)發(fā)低成本的現場(chǎng)側向層析檢測方法。
 

TwistAmp^? Liquid 是為了提供散裝液體形態(tài)的核心 RPA 組分，最終用戶(hù)能夠以不同的比例混合這些組分，以便用戶(hù)為各自的應用配制預混液*。

TwistAmp^? Liquid 具有以下優(yōu)勢：

最終用戶(hù)可自由調整預混液制備量，而不再被局限于凍干試劑的固定體積

最終用戶(hù)可自由調整反應體系中的組分比例，這使 RPA 試驗開(kāi)發(fā)工作具有更大的靈活性

TwistAmp^? Liquid Basic 是一款最適合用于凝膠分析或者作固相、加尾引物、適配體、電化學(xué)和微陣列應用的 DNA 擴增試劑盒。

TwistAmp^? Liquid exo 是一款用于以實(shí)時(shí)熒光檢測擴增反應的 DNA 擴增試劑盒。
 

以靈活的液體形態(tài)實(shí)現 DNA 擴增。包含 DNA 擴增所需的所有酶和試劑，用戶(hù)只需提供引物、dNTP 和模板。更多信息請參閱手冊。

非常適用于：終點(diǎn)凝膠電泳 DNA 檢測、下游應用（例如亞克?。?、便于使用不同的 RPA 反應體積或改變組分比例
 

以靈活的液體形態(tài)進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光 DNA 擴增。若想要將 RPA 與 TwistDx 專(zhuān)利熒光 TwistAmp^? exo 探針結合使用，則推薦使用本產(chǎn)品。除了基本的組分，還包含強大的核酸酶 （核酸外切酶 I），該酶將在擴增反應期間處理 TwistAmp^? exo 探針并產(chǎn)生實(shí)時(shí)讀出。用戶(hù)只需提供引物、探針、dNTP 和模板。

非常適用于：實(shí)時(shí)熒光 DNA 檢測，便于使用不同的 RPA 反應體積或改變組分比例

公司背景

TwistDx Inc. 由分子生物學(xué)家兼蛋白生物化學(xué)家 Niall Armes 博士以及 Derek Stemple 博士和 Nagesh Mahanthappa 博士于 1999 年共同創(chuàng )立，其總部位于美國馬薩諸塞州劍橋市。TwistDx Limited 于 2002 年成立，其公司位于英國劍橋，2010 年被 IVD 行業(yè) POCT 巨頭美艾利爾 Alere 收購，Alere 在 2017 年 4 月被雅培 Abbott 收購。

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• Twist Amp^? Liquid 研發(fā)試劑盒

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